临床生物化学和生物化学检验.ppt

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1、临床生物化学实验室基本技术与实验室质量管理第一节常用临床生物化学分析技术第二节常用免疫分析技术(自学)第三节生物芯片和生物传感技术第四节酶蛋白分离纯化技术(自学)第一节常用临床生物化学分析技术一、光谱分析技术二、电泳技术三、离心技术(了解)四、层析技术五、电化学分析技术一、光谱分析技术(一)吸收光谱分析法(二)发射光谱分析法(三)散射光谱分析法(一)吸收光谱分析法1.原理：利用物质吸收光谱谱系特征，确定其性质、结构或含量的技术。2.方法学评价优点：(1)灵敏度高，检测浓度在10-5~10-2mol/l范围。(2)操作简便、快速、选择性好和应用广泛

2、。(3)原子吸收分光光度法使用空心阴极灯作光源，谱线简单，由谱线重叠引起的干扰小(4)原子吸收分光光度法自动化程度高，在复杂样品分析中，可直接测定多种元素。缺点：(1)比色法需有标准品，有些反应的显色剂本身颜色会影响测定方法的灵敏度和特异性。(2)紫外法的吸收池需用石英玻璃作光学面。(3)原子法需特定元素的空心阴极灯，对难熔元素测定的灵敏度不够理想。CONTINUE3.类型：可见光及紫外光、原子吸收分光光度法(参考方法)4.临床应用（1）可见光及紫外光法多用于酶试剂终点法及化学法测定的项目（2）原子吸收分光光度法中用于Ca2+、Mg2+定值

3、或参考方法返回(二)发射光谱分析法1.原理：利用物质发射光谱特征，来确定其性质、结构或含量的技术。2.类型：荧光分析法：灵敏度高，检测范围广，临床常用。火焰光度法：操作烦琐，干扰因素多，已淘汰。3.影响荧光强度的因素：(1)溶剂。与荧光强度成反比。(2)荧光物质的浓度。F=I，I是激发光强度。浓度很小且厚度不变时成正比。反之，则反比。(3)温度。多数情况下，与荧光强度成反比。(4)溶液pH。不定。4.方法学评价：灵敏度高、选择性好、取样量少，但干扰因素较多。5.临床应用：糖类、胺类、DNA与RNA酶与辅酶，Vit类及Ca2+、Fe3+、Zn2

4、+等。返回(三)散射光谱分析法(比浊法)1.原理：利用光线通过混悬颗粒后产生的散射光谱特征，确定其性质…..2.类型：散射比浊法：根据光线通过混悬液后，光线减弱的程度来测定其浓度。不需特殊仪器。透射比浊法：速率和终点法。通过光线透过的强度来确定颗粒的浓度。需特殊仪器如激光比浊仪。3.影响比浊法测定的因素：(1)混悬颗粒大小；(2)颗粒形状；(3)混悬液的稳定性。因此，使用比浊法必须做到：(1)溶液中颗粒的分散度尽可能相同；(2)混浊液至少10min内保持稳定。4.临床应用：免疫球蛋白、载脂蛋白、补体、ASO、RF等。返回二、电泳技术(一)原理：

5、利用带电粒子在电场中向所带电荷相反的电极移动的性能，对物质分子进行分析测定。(二)电泳技术的分类与特点1.移动界面电泳(movingboundaryelectrophoresis)：已淘汰。2.区带电泳(zoneelectrophoresis)：一类是滤纸、醋酸纤维素膜、硅胶等；一类是淀粉、琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶等。其中后者的优点是：(1)使用细微多孔网状结构支持介质，可消除电荷效应、分子筛效应使分辨率提高；(2)几乎不吸附蛋白质，电泳无拖尾现象；(3)蛋白质在低浓度琼脂糖胶电泳时可自由穿透，阻力小，透明度高，敏感性高。因此，取代第一类电泳。CO

6、NTINUE(三)方法学评价设备简单，操作方便，具较高的分辨率及选择性，不足之处是干扰因素较多。(四)电泳技术的影响因素颗粒性质，电场强度，溶液性质，pH值，离子强度，溶液粘度，电渗和支持物等。(五)区带电泳的临应用测定项目有：血清蛋白、血红蛋白、糖化血红蛋白、脑脊液和尿液蛋白、脂蛋白及脂蛋白(a)、LDH、ALP、CK的同工酶及亚型。毛细管区带电泳可分离的项目包括：多肽、氨基酸、DNA、酶分子等。研究热点。返回四、层析技术(一)原理：利用固定相和流动相理化性质的差异而建立起来的分析技术。当流动相(待分离物质)经过固定相时，由于各组分的理化性

7、质差异，与两相发生相互作用(吸附、结合)的能力不同，在两相中的分配不同，随着流动相的推进，各组分在两相中进行不断再分配。与固定相作用弱的组分，受到阻力小，向前移动速度快，反之，移动速度慢，从而达到将样品中各单一组分分离的目的。(二)层析技术的类型：1.按两相所处状分：液-液层析法、液固层析法、气-液层析法、气-固层析法2.按操作模式不同分：柱层析法、薄层析法、纸层析法、薄膜层析法3.按层析原理分：吸附层析法---固定相是固体吸附剂分配层析法---固定相是静止的液体CONTINUE离子交换层析法------固定相是离子交换剂凝胶层析法---

8、---固定相是多孔凝胶亲和层析法------固定相可以是固体、液体或凝胶，但只能与一种待分离的成份专一结合。(三)层析法的特点及应用层析