生理学实验设计报告.doc

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1、不同浓度的K+Ca2+对离体蛙心兴奋性的影响引言：心脏的功能是兴奋与收缩，兴奋以离子为基础，因此细胞外或血浆中的离子浓度的变化，对心脏有重要影响，其中K+，Ca2+极为重要。根据比较不同浓度K+，Ca2+引起离体蛙心发生期前收缩的最低刺激强度，刺激强度大则兴奋性较低。从而得出结论。因此我们设计以下实验，初步研究K+，Ca2+对心脏兴奋性的影响，以期加深对心脏正常功能的了解和初步探讨异常功能的形成原理。一、研究内容1、离体蛙心灌流的操作方法2、不同浓度的K+，Ca2+对离体蛙心兴奋性的影响二、材料与方法1实验材料实验动物：蟾蜍规格：体型大

2、小适中（腓肠肌适于实验）、体重相差±0.1g选用原因：肌肉易分离、操作简便、体形适中，适于实验实验试剂：不同浓度的Kcl溶液与Cacl2溶液标准任氏液实验器械：BL-420生物机能实验系统，张力换能器，铁支架，双凹夹，试管夹，蛙心套管，蛙心夹，蛙板，蛙类手术器械，滑轮，滴管，小烧杯，棉线，刺激器2实验步骤及方法不同K+，Ca2+浓度的任氏液的制备（1）以标准任氏液中K+的浓度为“1”，分别配置1/8倍，1/4倍，1/2倍，1倍，2倍，4倍，8倍的K+浓度的任氏液（保证标准任氏液中其他离子浓度不变）。（2）同理，配置同样不同的Ca2+浓度

3、的任氏液。蟾蜍的选取与分组（1）按实验材料规格取蟾蜍6只，随机分成A，B两组，每组3只，对A组的3只蟾蜍分别标记为A1A2A3对B组的3只蟾蜍分别标记为B1B2B3（2）将A组的A1A2设为实验组，A3设为对照组；B组的B1B2设为实验组，B3设为对照组。（3）分别对A，B两组的6只蟾蜍制作离体蛙心标本离体蛙心标本的制备（1）暴露蛙心：取蟾蜍一只，毁坏脑和脊髓，将其仰卧固定在蛙板上。从剑突下将胸部皮肤向上剪开或剪掉，然后剪掉胸骨，打开心包，暴露心脏和动脉干。（2）观察心脏的解剖结构：在腹面可以看到一个心室，其上方有两个心房，心室右上角连

4、着一个动脉干，动脉干根部膨大为动脉圆锥，也称动脉球。动脉向上可分左右两支。用玻璃针从动脉干背部穿过，将心脏翻向头侧，在心脏背面两心房下面，可以看到颜色较紫红的膨大部分，为静脉窦，这是两栖类动物心脏的起搏点，观察静脉窦、心房、心室间收缩的先后关系（3）心脏插管：先用丝线分别结扎右主动脉、左右肺动脉、前后腔静脉，也可以在心脏下方绕一丝线，将上述血管一起结扎，但此结扎应特别小心，勿损伤静脉窦，以免引起心脏骤停。结扎时，可用蛙心夹在心舒期夹住心尖，将心脏连线提起，看清楚再结扎。准备插管，在左主动脉下穿一丝线，打一松结，用眼科剪在左主动脉上向心剪

5、斜口（一定要剪破动脉内膜），让心脏里的血尽可能流出（以免插管后血液凝固）。用任氏液将流出的血冲洗干净后，把装有任氏液的蛙心插管插入左主动脉，插至主动脉球后稍退出，再将插管沿主动脉球后壁向心室中央方向插入，经主动脉瓣插入心室腔内。此时可见插管内液面随心搏上下移动。将预先打好的松结扎紧，并将线固定在插管壁上的玻璃小钩上防止滑脱，用滴管吸去插管内液体，更换新鲜的任氏液，小心提起插管和心脏，在上述血管结扎处的下方剪去血管和所有的牵连组织，将心脏离体。此时，离体蛙心已制备成功，可供实验。（4）6只离体蛙心标本制备好后，随时滴加任氏液于心脏表面，使

6、心脏保持正常的体液环境.连接标本及实验装置（1）将插好的离体心脏套管A1固定在支架上，用带有一段棉线的蛙心夹在蛙心舒张期夹住少许心尖部肌肉。将蛙心上的系线绕过一个滑轮与张力换能器相连（注意不要让心脏受到过度的牵拉），张力换能器与计算机前面板信号输入接口相连（注意勿使灌流液滴到传感器上）。并将刺激器的输出孔与刺激电极相连。（2）启动计算机进入BL---420生物机能试验系统操作界面，用鼠标左键单击菜单条的“实验项目”→“循环实验”→“蛙心灌流”，系统自动进入该实验记录存盘状态。可根据曲线的具体情况，调节基线及参数设置：显速→1.00～2.

7、00s/div;G→100;T→DC;F→30HZ，使曲线达到理想状态。（3）观察正常的心跳曲线并分析曲线的疏密代表心跳的频率，可根据显速来计数。曲线的规律性代表心跳的节律性。曲线的幅度代表心室收缩的强弱。曲线的顶点水平代表心室收缩的程度。曲线的基线代表心室舒张的程度。不同浓度的K+对离体蛙心兴奋性的影响（1）在上述观察的蛙的心跳曲线正常的情况下，吸出插管内的全部灌流液，换入1/8K+浓度的任氏液，观察心跳曲线的变化，待明显后，在心跳曲线的舒张中期或晚期对给予离体蛙心一适当强度的电刺激，观察是否引起期前收缩。如能引起，逐渐减小刺激强度，

8、找到引起期前收缩的最低刺激强度；如不能，则逐渐升高刺激强度找出。找出后，并记录。（2）在记录完成后，吸出插管内的灌流液，用新鲜标准任氏液换洗3次，直至心跳曲线恢复正常。换入1/4K+浓度的任氏液，观察心跳曲