CLSI临床质谱新标准解读.doc

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1、CLSI临床质谱标准C62-A新内容解读CLSI临床质谱标准C62-A主题内容架构由基础内容部分包括（1）范围、（2）标准预防措施、（3）术语、（4）仪器；方法内容包括（5）预考察事项、（6）方法建立、（7）方法验证；质控内容包括（8）液质检验方法的质量保证与质量控制、（9）后续监督构成。其中方法和质控内容是与应用过程直接相关的。下面进行具体介绍。5．预考察事项（preexaminationconsiderations）5.1目标分析物内容包括5.1.1外源性物质、5.1.2内源性物质、5.1.3外源性和内源性物质的相关因素、5.1.4样本采集。要充分了解目标分析物的性质，包含（1）

2、目标分析物的临床意义如生理意义、临床价值、常用检测方法等；（2）理化性质如结构式、分子量、沸点、极性大小、酸碱性等；（3）存在形式如游离型、结合型；（4）干扰因素如类似物、同分异构体、其他代谢产物等；（5）预期浓度如常量级、微量级、参考区间浓度、切点浓度、病理浓度等；（6）样本类型如血清、血浆、全血、尿样、唾液、胆汁、组织等；（7）采集和处理方式如静脉血、足底血、指尖血、离心处理或静置、何种采血管等；（8）储存和运输方式如避光、冷藏、冷冻等。5.2内标内标可以校正基质效应或者样本萃取、色谱分离、离子化过程中产生的偏差，有利于提高定量分析的准确性和精密度及方法稳定性。5.3试剂和耗材的

3、质量5.3.1试剂盒耗材的质量：由于MS灵敏度高，因此试剂和耗材要求也高。在使用前应对试剂、耗材进行验证，避免其中杂质对MS的影响。使用过程中应按照SOP进行保存、操作，避免污染。按照ISO17025:2017进行批间次管控。5.3.2实验室设备：配置校准品和内标时，实验室应使用A级的容量瓶和移液器。6．方法建立（assaydevelopment）6.1离子转变（iontransition）在建立和优化质谱采集参数的过程中，要先配制标准物质溶液直接导入质谱检测器进行质谱扫描，获取目标化合物的相关信息。根据目标分析物的极性选择合适的离子化方式：ESI源适合中等偏大极性化合物、难挥发化合

4、物或热不稳定化合物；APCI源适合有一定挥发性的中等极性或低极性的小分子化合物。根据化合物的功能基团选择正负离子模式，然后选择合适的离子对分别作为定量离子对和定性离子对。之后，优化化合物参数，包括离子源参数以及质谱扫描参数，使所选择的离子对质谱响应值最高。6.2高效液相色谱固定相色谱柱种类繁杂，色谱柱选择通常取决于目标分析物的元素组成和化学结构。弱极性固定相有C18、C8、苯基柱等，极性固定相有氨基柱、氰基柱、硅胶柱等。要注意色谱柱的耐压范围和pH使用范围。当更换色谱组时，应使用系统适用性样本（SSS）进行核查。6.3高效液相色谱流动相流动相的设计取决于目标分析物的理化性质和色谱柱的

5、特性。影响分离效果的流动相参数包括溶剂组成和比例、流速、离子强度、pH值、添加剂和温度等。其中避免使用的添加剂有非挥发盐、无机盐（腐蚀离子源）、表面活性剂（抑制电喷雾）、离子对试剂（影响后续离子化）。进行梯度洗脱或等度洗脱时，要注意溶剂比例、进样量、运行时间、梯度范围、柱温、样品溶剂等因素对分析结果的影响。应明确标注流动相的有效期。6.4参数考察（examinationvariables）6.4.1保留时间控制流动相、色谱柱及外部条件（如温度）等。要预混合、防蒸发、控制pH值、保证泵流速。要求每次检测保留时间变化在±2.5%内。6.4.2色谱分辨率应达到基线分离Rs>1.25。可以通

6、过增加色谱柱长度、改变流动相组成和比例、减缓梯度、降低流速和提高柱温来实现良好的色谱分离。6.4.3其他改善色谱质量的因素如使用保护柱、减少死体积、检查管线连接到位等。6.4.4信噪比LLMI处S/N至少大于10，建议大于20。改善S/N的措施有考察基质效应、再优化提取效率、离子源参数、洗脱梯度、重组溶液、进样体积，优化驻留时间，优化进样量，优化前处理以及考虑衍生。6.4.5色谱峰数据点和积分推荐15-20个数据点，定量项目最低不少于10个数据点进行拟合。采集数据点的个数应与驻留时间有关。采用正切斜滑（tangentskim）方式积分非基线分离色谱峰。6.5误差来源6.5.1由基质效

7、应引起生物样本高度复杂，基质组成一般包括盐类、脂类、蛋白、多肽有机小分子等。盐类、脂类（特别是磷脂）是离子化效率最重要的影响因素。多数基质干扰可以通过样品前处理或色谱分离去除。6.5.2碎片离子的交叉干扰如果两个碎片离子有相同的m/z，并且同时进入碰撞室可能会发生干扰。新筛等项目需要同时采集多离子通道信号时也可能会发生碎片离子干扰。驻留时间和切换通道时间极端（<1ms）时也易出现碎片离子交叉干扰。6.5.3内调和校准品的杂质6.6方法校准（assaycal