植物生理学B实验教案.doc

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1、河南科技大学农学院戴凌峰2012年2月目录1.植物组织水势的测定2小液流法22.光合色素的分离和理化性质观察32.1光合色素的提取与分离32.2叶绿体色素的理化性质观察53.植物呼吸速率的测定64.丙二醛含量的测定84.1直线回归法84.2双组分分光光度计法85.光合色素的提取及含量测定9附：光合色素简便提取方法126.生长素类物质对根、芽生长的影响127.植物根系活力的测定-TTC法138.植物细胞差别透性的测定141.植物组织水势的测定植物组织的水分状况可用水势来表示。植物体细胞之间、组织之间以及植物体与环

2、境之间的水分移动方向都由水势差决定。将植物组织放在已知水势的一系列溶液中，如果植物组织的水势(Ψcell)小于某一溶液的水势(Ψout)，则组织吸水，反之组织失水。若两者相等，水分交换保持动态平衡。组织的吸水或失水会使溶液的浓度、密度、电导率以及组织本身的体积与质量发生变化。根据这些参数的变化情况可确定与植物组织等水势的溶液。液体交换法测定水势的方法有多种，下表是所列三种方法的原理。液体交换法测定水势的种类和原理判据依据ΔΨ=Ψout-Ψcell组织水分得失变化外液密度变化外液浓度变化外液电导度变化ΔΨ<0吸水

3、升高增加增高ΔΨ>0失水降低降低降低ΔΨ=0平衡不变不变不变测定方法小液流法折射仪法电导仪法使用器材毛细移液管折射仪电导仪适用材料叶片或碎组织叶片或碎组织叶片或碎组织小液流法【原理】小液流法是由俄国人夏尔达可夫修改而成。实验中常用甲烯蓝着色，有人称为着色法(DyeMethod)。此法是以比重大小测定蔗糖溶液浓度变化，因此又称为比重法(DensitometrilMethod)。当植物组织与外界溶液接触时，若组织水势小于外液水势，水分进入植物组织，外液浓度增高；相反，组织水分进入外液，使外液浓度降低；若二者水势相等

4、，组织不吸水也不失水，外液浓度不变。溶液浓度不同，比重不同。取浸过组织的蔗糖溶液一小滴(为便于观察加入少许甲烯蓝)，放入未浸植物组织的原浓度溶液中，观察有色溶液的沉浮。若液滴上浮，表示浸过样品后的溶液浓度变小；液滴下沉，表示浸过样品后的溶液浓度变大；若液滴不动，表示浓度未变，该溶液水势即等于植物组织水势。实际测定时，常常不易找到有色液滴不动的溶液，而是取接近组织水势的相邻两种溶液浓度的平均值。【仪器与用具】水势测定取样箱；小试管；大试管；毛细移液管；试管架；打孔器；干净硬纸片；镊子【试剂】1.蔗糖溶液：按重量法

5、试剂配制不同浓度蔗糖溶液，或按附表配成不同水势蔗糖溶液。2.甲烯蓝(研成粉末)。【材料】豆芽下胚轴【方法】1.取5个干净的小试管和相同数量的大试管，用1M的蔗糖母液分别配制0.05,0.2,0.4,0.6,0.8M的蔗糖溶液10ml于大试管中，将3ml转移入对应小试管。2.取粗细均匀的豆芽下胚轴5根，切成1CM左右小段，混匀，分别装入小试管底部，每管装10根左右。摇匀，放少许甲烯蓝，静置15~20min。3.用干净的毛细移液管，吸挤小试管底部蓝色溶液，使其充分混合均匀，并吸取1~2滴，小心地插入装着相对应同浓度

6、蔗糖溶液大试管溶液的中部，轻轻地挤出一小滴蓝色溶液，慢慢转动毛细管头部，抽出毛细移液管，观察蓝色液滴流动方向。蓝色溶液不动的试管或蓝色液滴上浮、下沉的两个相邻试管蔗糖浓度的平均值，即为等势点。附表：100ml蒸馏水中加入不同蔗糖配成不同水势溶液蔗糖溶液水势(-巴)100毫升蒸馏水加入蔗糖克数蔗糖溶液水势(-巴)100毫升蒸馏水加入蔗糖克数24681012142.745.458.1110.7413.3415.9118.441618202224262820.9923.4225.8628.2830.6833.0435

7、.38【结果计算】如蔗糖溶液按水势值配制，测出的结果不必再进行运算。若蔗糖溶液按摩尔浓度配制，按下式计算植物组织水势。Ψcell=Ψout=-iCRT式中，Ψcell-植物组织水势Ψout–外界溶液渗透势单位为大气压，最后换算成标准单位Pa1大气压=1.013巴=1.013×105PaC-等势点的蔗糖浓度（摩尔/升）R-气体常数[0.082大气压·升/(摩尔·度)]T-绝对温度，即273+t(t为当时温度)i-解离常数（蔗糖为1）【思考题】1.测定材料为叶片时，用其小圆片与外液进行水分交换，有何缺点？2.用小液

8、流法测定植物组织的水势与质壁分离法测定植物细胞的渗透势都是以外界溶液的溶质势算出植物组织的水势，它们之间的区别何在？2.光合色素的分离和理化性质观察2.1光合色素的提取与分离【原理】叶绿体中含有绿色素（包括叶绿素a和叶绿素b）和黄色素（包括胡萝卜素和叶黄素）两大类。它们与类囊体膜上的蛋白质相结合，而成为色素蛋白复合体，这两类色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇或丙酮等有机溶剂提取