基因突变检测PCR-SSCP实验条件优化研究.pdf

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1、西北大学学报(自然科学版)2014年6月，第44卷第3期，Jun．，2014，Vo1．44，No．3JournalofNo~hwestUniversity(NaturalScienceEdition基因突变检测PCR．SSCP实验条件优化研究张关杰，李军林，杨星，高晓彩，(1．西北大学生命科学学院／人口与健康研究所，陕西西安710069；2．西北大学公共管理学院／应用心理学研究所，陕西西安710127)摘要：探索基因突变检测PCR—SSCP技术的最佳实验条件。以人血液DNA为实验材料，人类基因组天然存在的基因突变位点为研究对象，依次对不同的变性剂、交联度、电泳缓冲液、电泳时间、电压以及有无甘油

2、等因素进行PCR．SSCP最优条件分析。利用碱性变性剂对DNA变性，电泳条件为不加甘油的14％凝胶(交联度为29：1)，0．5×TBE电泳缓冲液、300V电泳4h后18OV电泳14h，得到较理想的PCR-SSCP电泳图谱，此为摸索出的最佳条件。该条件在筛选基因突变过程中是一种简便、快速、灵敏、经济和有效的实验方法。关键词：PCR—SSCP；基因突变；最佳条件中图分类号：Q987文献标识码：A文章编号：1000—274X(2014)03-0439-05Theoptimumresearch0fPCR-SSCPtechniqueingenemutationdetectionZHANGMei-jie，

3、LIJun．1in，YANGXing，GAOXiao．cai'(1．CollegeofLifeScience／InstituteofPopulationandHealth，No~hwestUniversity，Xian710069，China；2．DepartmentofPublicAdministration／InstituteofAppliedPsychology，NorthwestUniversity，Xian710127，China)Abstract：TogropethePolymerasechainreaction—singlestrandconformationpolymorphi

4、sm(PCR—SSCP)techniqueintheprocessofscreeninggenemutation．TakinghumanbloodDNAasexperimentmaterialandse-lectinggenemutationsitewhichnaturallyexistinginthehumangenomeastheresearchobject，gropingtheop-timumconditionsofPCR-SSCPthroughdifferentdenaturants，crosslinkingdegree，electrophoresisbuffer，e—lectroph

5、oresistime，voltageandwiththepresenceofglycerolornot．Theoptimumconditionareasfollows：al—kalinedenaturantforDNAdenaturation，gelconcentrationof14％withoutglycerol，crosslinkingdegreeof29：1，electrophoresisbufferof0．5×TBE，electrophoresisfor14hat180Vafter4hat300V．ThegropedPCR—SSCPconditioninthisstudyisasimp

6、le，rapid，sensitive，economicandeffectiveexperimentalmethodforscreeninggenemutation．Keywords：PCR—SSCP；genemutation；optimumcondition收稿日期：2013—11-06基金项目：国家自然科学基金资助项目(31071103，31371327)；西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室开放基金资助项目(ZS11005)；陕西省教育厅自然科学基金资助项目(JH11241，JH11282)；西北大学研究生自主创新基金资助项目(YZZ12054)作者简介：张美杰，女，河北廊坊人，西北

7、大学博士生，从事分子遗传学研究。通讯作者：高晓彩，女，陕西乾县人，西北大学教授，从事认知行为遗传学研究。·440·西北大学学报(自然科学版)第44卷基因突变与许多疾病的发生密切相关，有时条件，让该技术操作变得更为简便，更适合一般实仅有1个碱基的改变就会造成机体患病甚至死验室的应用。进而使PCR．SSCP技术为治疗人类亡，因此搜寻基因突变成为许多疾病研究的切人疾病提供更好的应用效果。点。聚合酶链反应