纳米羟基磷灰石骨组织工程支架材料的体外细胞毒性评价.pdf

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1、西部医学2014年8月第26卷第8期MedJWestChina，August2014，Vo1．26，No．8·975·丝素蛋白／壳聚糖／纳米羟基磷灰石骨组织工程支架材料的体外细胞毒性评价*马立坤，叶鹏，邓江，黄文良，田仁元，吕雪峰(遵义医学院第三附属医院骨科，贵州遵义563000)【摘要】目的探讨丝素蛋白／壳聚糖／纳米羟基磷灰石生物支架与兔骨髓间充质干细胞的体外细胞毒性。方法采用丝素蛋白／壳聚糖／纳米羟基磷灰石构建的生物支架与兔骨髓问充质干细胞体外共培养，用材料的细胞毒性、细胞黏附率、细胞增殖活力指标以MTT法、倒置显微镜及电镜观察来评价。结果细胞在支架材料上黏附、生

2、长良好，分裂增殖活跃，细胞毒性检测CTG均为0级，实验组与对照组细胞黏附率比较无统计学差异(P>0．05)，实验组与对照组细胞增殖活力随着时间增加，细胞在支架增殖速度增快。第1、3、5、7天实验组与对照组比较有统计学差异(P<0．05)。扫描电镜观察发现细胞培养7天后生长良好，分裂正常，与支架材料黏附紧密。结论支架材料对细胞无毒性，具有很好的细胞相容性。【关键词】丝素蛋白；壳聚糖；纳米羟基磷灰石；细胞毒性；骨髓间充质干细胞【中图分类号】R683【文献标志码】Adoi：10．396~c》／J．issn．1672—3511．2014．08．005Thecytotoxici

3、tyofsilkfibr0in／chit0san／nanohydroxyapatitebonetissueengineeringscaffoldsinvitroMALi—kun，YEPeng，DENGJiang，etal(DepartmentofOrthopedics。TheThirdAffiliatedHospitalofZunyiMedicalCollege，Zunyi563000，Guizhou，China)[Abstract]ObjectiveToexplorethecytotoxicityofsilkfibroin／chitosan／nanohydr0xya

4、patitebiologicalscaffoldonrabbitbonemarrowmesenchymalstemcellsinvitro．MethodsThesilkfibroin／chitosan／nanohydroxyapatitebiologi—calscaffoldwasco—culturedwithrabbitbonemarrowmesenchyma1sterncellsinvitro．Thecytotoxicity，cel1adhesionrateandcellproliferationactivityweredeterminedbyMTTmethod，

5、invertedmicroscopeandelectronmicroscope．ResultsCelladhesionandgrowthonscaffoldmaterialweregood．Cytotoxicitywaslevel0．Theproliferationactivityat1，3，5and7werestatisticallydifference(P<0．05)．Scanningelectronmicroscopy(sem)observedinThecellscultureedfor7daysgrownwellandadheredtightlywithsca

6、ffoldmaterialdetectedwithscanningelectronmicroscopy．ConclusionScaf—foldmaterialforcellhasnon-toxicandhastheverygoodcellcompatibility．[Keywords]Silkfibroin；Chitosan；Nanohydroxyapatite；Cellcytotoxicity；BMSCs理想的骨组织工程支架材料首先应具备良好的比单独应用更合符骨组织工程要求[6]。骨髓间充质生物相容性，合适的孔径及生物降解性]。丝素蛋干细胞具有自我复制及向成骨细胞定

7、向分化潜能而白(silkfibroin，SF)、壳聚糖(chitosan，CS)、纳米羟基成为骨组织工程的理想种子细胞之一L7]。因此，本实磷灰石(nanoHydroxyapatite，HA)均是天然生物材验采用支架与骨髓间充质干细胞共培养通过MTT法料，具有无毒、良好的生物相容性及降解性l_3]，分别及电镜检测其材料毒性。在骨组织工程材料的应用研究中取得一定的成果。1材料与仪器而单但独使用时都存在一些不足。前期实验将三者1．1试剂及仪器DMEM培养基、胰酶、胎牛血清按1：1：1比例混合制备出SF／CS／n—HA生物支架，在(Hyelone公司)；M