神经生长因子对戊四氮致痫幼鼠海马细胞色素C表达的影响.pdf

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1、叠塑盟2014JuneJF,v。148N。。ujianMedUniv⋯⋯15l神经生长因子对戊四氮致痫幼鼠海马细胞色素O表达的影响臧欢欢，陈琅，刘蕊，林琳，陈巧彬，方琼摘要：目的用戊四氮(PTZ)诱导建立的慢性癫痫(EP)幼鼠模型，研究神经生长因子(NGF)处理后幼鼠海马细胞色素C(CytC)的表达，探讨NGF在EP发病中的作用。方法5o只SD幼鼠随机分为阴性对照组(A组)、阳性对照组(B组)、NGF低剂量组(c组)、NGF中剂量组(D组)、NGF高剂量组(E组)。NGF用药后3d，取海马组织用于免疫组织化学及实时荧光定量PCR方法检测

2、CytC的表达。结果与A组比较，B组CytC阳性细胞数及mRNA表达量明显增多(P<0．01)。与B组比较，c～E组CytC阳性细胞数及mRNA表达量降低(P

3、盒(ak3202，日本脂肪、氨基酸等多种物质发生氧化反应的场所，参与TaKaRa公司)；CytC及GAPDH引物由上海生物了细胞的能量代谢、凋亡调控、神经递质合成等一系工程技术服务有限公司设计合成。石蜡切片机列体内生化反应过程。近年来，线粒体在癫痫(epi—(RM2245型，德国Leica公司)；生物组织摊烤片机lepsy，EP)发病中的作用得到了学者的广泛关注。(JK一5型，武汉俊杰电子有限公司)；高速冷冻离心EP发作时脑内神经元高度同步异常放电产生大量机(KDC一160HR，科大创新股份有限责任公司)；低有害物质作用于线粒体，使线粒

4、体内膜通透性增高，速离心机(KDC一40型，科大创新股份有限责任公线粒体内物质如细胞色素C(cytochromeC，Cytc)司)；荧光定量PCR仪(TP800，日本TaKaRa公从内膜释放入胞质，诱发神经细胞凋亡。线粒体的司)；电子计量称(ACS—A型，上海友声衡器)。损伤又可增加EP的易感性，加重EP造成的神经元1．2方法损伤E。笔者通过比较不同用药组幼鼠海马细胞凋1．2．1分组采用随机分组法，将5O只大鼠分为亡调控关键蛋白CytC的表达，探讨神经生长因子A组(阴性对照组)、B组(阳性对照组)、C组(NGF(NGF)对慢性EP幼鼠的

5、可能作用机制。低剂量组)、D组(NGF中剂量组)、E组(NGF高剂量组)，每组10只。1材料与方法1．2．2建立模型A组：生理盐水以4mL／kg腹1．1材料腔注射，连续21d，改为0．2mL生理盐水大腿外侧1．1．1动物清洁级SD雄性大鼠[上海斯莱克实肌肉注射(IM)，连续7d。B组：40mg／kgPTZ腹验动物有限责任公司，许可证号：SCXK(闽)腔注射，21d，改为0。2mL生理盐水大腿外侧IM，20120001150只，日龄19d，体质量5O～70g，清洁连续7d。C～E组：先用40mg／kgPTZ腹腔注射，级。连用21d后，分别

6、大腿外侧IMmNGF500、1000、1．1．2试剂和仪器戊四氮(PTZ，生产批号：2000Au·kg·d_。，连续7d。各组幼鼠均在SLBD3876V，美国Sigma公司)，用生理盐水配至质NGF用药结束后3d断头取脑组织。量浓度为10g／L；鼠神经生长因子(mNGF，生产批1．2．3慢性EP点燃的标准EP发作分级按号：20130504，厦门北大之路生物工程有限公司)，用Racine分级法E，凡连续5次2级以上的发作即判生理盐水配至质量浓度为0．4mg／mL；CytC兔抗定该鼠被慢性点燃，慢性点燃后PTZ腹腔注射由每大鼠一抗(GR97

7、27—8，美国Abcam公司)；逆转录反日1次改为2～3d1次。共21d。实验中，B～E组大鼠在PTZ用药14d均被慢性点燃，点燃率为收稿日期：2014—04—22100。基金项目：福建省自然基金(2010J01121)；福建省医学创新基金(2009-CXB-8)1．2．4标本的制备及检测作者单位：福建医科大学省立临床医学院，福建省立医院儿科，福1．2．4．1动物标本采集及免疫组织化学法具体州350001作者简介：臧欢欢(1992一)，女，医学硕士．现在蚌埠医学院第一附操作参见文献[33。阳性细胞表现为胞质中出现棕属医院儿科工作黄色颗粒

8、，染色结果从阳性细胞数来判定。每张蜡通讯作者：陈琅．Email：chenlangl1@sohu．com臧欢欢等：神经生长因子对戊四氮致痫幼鼠海马细胞色素C表达的影响1532．3实时荧光PCR法检测幼鼠海马C