绒毛膜尿囊膜血管实验替代眼刺激实验研究.pdf

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1、中国职业医学2013年10月第40卷第5期ChinOccupMed，October2013，Vo1．40，No．5doi：10．11763／j．issn．2095—2619．2013．05．012·研究与实践·绒毛膜尿囊膜血管实验替代眼刺激实验研究Studyonusingchorioallantoicmembranevascularassayasanalternativemethodofdraizeeyeirritationtest王宁，仇峰，施志冲，郑志清，洪新宇，帅怡，肖萍WANGNing，QIUFeng

2、，SHIZhi—chong，ZHENGZhi—qing，HONGXin—yu，SHUAIYi，XIAOPing上海市疾病预防控制中心毒理研究室，上海200336摘要：目的探讨使用绒毛膜尿囊膜血管实验(CAMVA)替代动物眼刺激实验(Draize实验)的可行性。方法用CAMVA方法对十二烷基磺酸钠(SDS)、吐温20和过硼酸钠的眼刺激性进行检测，得到半数反应浓度(RC)值，与世界经济合作与发展组织(OECD)数据库化学物眼刺激分级比对，并与Draize实验最大平均值(MAS)和24h作用值的结果进行相关性比较。

3、结果SDS以充血反应为主，RC。为0．1mol／L(有刺激)，OECD数据库眼刺激分级为中度；吐温20以出血反应为主，RC。为0．53mol／L(有刺激)，OECD数据库眼刺激分级为轻度；过硼酸钠则出现凝血效应，RC为0．03moL／L(有刺激)，OECD数据库PIlaU激分级为无刺激。LogRC与Draize实验MAS和24h作用值的相关系数分别为0．9736和0．9434(P<0．05)。结论CAMVA可能是一种有效的眼刺激实验替代方法，仍需要更多的实验加以验证。关键词：眼刺激；离体实验；替代方法；绒毛膜

4、尿囊膜血管实验中图分类号：R139．3；R135．92；R114文献标识码：A文章编号：2095—2619(2013)05—0433—04体内眼刺激实验(Draizeeyeirritationtest，以下简级比对，并和Draize实验评分进行相关性分析，以探称“Draize实验”)自20世纪50年代起一直作为评价讨CAMVA作为Draize实验替代方法的可行性。化学物眼刺激作用的传统方法。但是，许多研究发现该方法在实验室问和实验室内的结果常有很大差异，1材料和方法故对Draize实验作为眼刺激评价的惟一方法

5、产生了质疑J。同时，近年来由于动物福利、动物保护运动1．1受试物和试剂受试物的选择标准参照OECD的兴起和人们对“3R”(减少、优化、替代)运动的关数据库，所选择的3种受试物包括阴离子表面活性剂注J。欧美各国已广泛开展了Draize实验的离体替十二烷基磺酸钠[Sodiumlaurylsulphate，SDS，美国化代方法研究，并通过了验证，很多产品的评价方法都学文摘服务社登记号(ChemicalAbstractServiceNum—开始采用离体替代方法作为新的研究策略。绒毛膜ber，CASNO)：151-21

6、·3]、非离子型表面活性剂吐温尿囊膜血管实验(Chorioallantoicmembranevascularas—20(Tween20，CASNO：9005—64．5)、无机盐过硼酸钠say，CAMVA)利用尿囊绒膜(CAM)与结膜结构相似的(CASNO：10486-00-7，分析纯，美国Sigma公司)。无特点，通过检测化学物对CAM的损伤并量化为半数特定病原体级“白色来亨”受精鸡卵(上海家禽育种反应浓度(Medianreactiveconcentration，RC50)，来评价有限公司)；新西兰白色家兔(

7、上海生旺实验动物养殖其眼刺激性。国外用CAMVA作为Draize实验的一种有限公司)；荧光素钠(CASNO：518．47．8，分析纯，美替代方法已发展到验证研究阶段。本研究使用国Sigma公司)；硅酮橡胶环(直径10mm，广东省疾病CAMVA对3种化学物质进行检测，将结果与世界经预防控制中心)。济合作与发展组织(OrganizationforeconomicCO．opera．1．2受精鸡卵孵育受精鸡卵，质量为50～60g，在tionanddevelopment，OECD)数据库化学物眼刺激分(37．5±0．5

8、)℃，相对湿度为70％的条件下进行孵育。孵育过程中，鸡蛋气室端向上，每小时进行自动翻转。作者简介：王宁(1979一)，女，卫生毒理学硕士，主管医师，主要从孵育第4天起光照检查，用光源确定胚胎的位置，在从事化妆品体外替代方法研究蛋的窄端钻1个小孔，用针管吸出2．0～2．5m1蛋清通讯作者：肖萍主任医师，E-mail：pxiao@scdc．sh．cn液，用火棉胶封住小孔。在胚胎顶部位置，用手持钻中国职业