干涉BmNPV极早期非必需基因ie-2的转基因家蚕系统构建和抗性检测.pdf

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1、5C『e仃cD厂5≮1譬掣幽2013，39(4)：0710—0715ISSN0257—4799；CN32—1115／SE-mail：CYKE@chinajourna1．net．cn干涉BmNPV极早期非必需基因．2的转基因家蚕系统构建和抗性检测蒋亮彭正文党颖慧赵萍肖阳邢东旭夏庆友(’家蚕基因组生物学国家重点实验室，西南大学，重庆400716；广东省农业科学院蚕业与农产品加工研究所，广州510610)摘要家蚕核型多角体病毒(BmNPV)是严重危害家蚕的病原之一。为了探究通过转基因干涉BmNPV非必需基因抑制病毒的增殖，提高家蚕抗性的可行性，选

2、择BmNPV极早期非必需基因ie一2作为靶标，构建转基因干涉载体，通过显微注射获得转基因家蚕系统A4Pie2H—A和A4Pie2H．B。3龄幼虫添食感染BmNPV后，A4Pie2H—A与A4Pie2H-B的幼虫死亡率分别比非转基因对照品种降低19％和24％：定量PCR结果显示A4Pie2H—A与A4e2H—B的幼虫体内的ie一2mRNA表达量分别为非转基因对照品种的50％和20％，病毒DNA含量分别为非转基因对照品种的32％和12％。此外，2个转基因家蚕系统的全茧量和茧层率与正常家蚕品种比较无显著差异。研究结果表明，干涉BmNPV极早期非必

3、需基因ie一2可以显著抑制转基因家蚕体内病毒的复制增殖，使幼虫死亡率降低。关键词家蚕核型多角体病毒；非必需基因；ie一2；转基因干涉；家蚕；抗性；经济性状中图分类号$884．51；Q789文献标识码A文章编号0257—4799(2013)04—0710—06ConstructionandResistanceAssayofTransgenicSilkwormExpress—ingRNAiTargetingNonessentiallmmediateGene／e-2ofBmNPVJIANGLiangPENGZheng—Wen’DANGYing—H

4、uiZHAOPing’XlAOYangXINGDong—Xu’，XIAQing—You’(’StateKeyLaboratoryofSilkwormGenomeBiology，SouthwestUniversity，Chongqing400716，China；Sericulture＆Agri—foodProcessingResearchInstitute，GuangdongAcademyofAgriculturalSciences，Guangzhou510610，China)AbstractBombyxmorinucIeOpO1vhedrO

5、virus(BmNPV)isoneofthepathogenscausingseveredamagetosilkwormfBombyxmori1．InanattempttoexplorethefeasibilityofinhibitingBmNPVproliferationandenhancingresistanceofsilk—wormthroughintroducingRNAitargetingnonessentialgeneofBmNPV，thenonessentialgeneimmediateearly一2(ie一2)0fBmNPV

6、waschosentoconstructtransgenicRNAivector．andtogeneratetransgenicsilkwormlinesA4Pie2H—AandA4Pie2H—Bviamicroinjection．AfteroraIinfectionofBmNPV．themortalityrateofthe3rdinstarIarvaeofA4Pie2H—AandA4Pie2H．Bdecreasedbv19％and24％respectivelycomparedtothatofthenon—transgenicsilkwor

7、m．QuantitativePCRrevealedlhatthemRNAlevelof佰-2inA4Pie2H—AandA4Pie2H—Bwas50％and20％tolhalofthenon—transgenicsilk一wormrespectively．andtheaccumulatedBmNPVDNA收稿日期：2012—12—27接受日期：2013—0l一29contentwas32％and12％tothatofthenon—transgenic资助项目：国家高技术研究发展计划“863”项目(No．2011AA100306，silkwo

8、rmrespectively．Besides，cocoonweightandco—2013AA102507)，国家重点基础研究发展计划“973”项目coonshelIrateof