乳品安全标准规范文件：食品微生物学检验 沙门氏菌检验.pdf

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1、中华人民共和国国家标准GB4789.4—2010食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验NationalfoodsafetystandardFoodmicrobiologicalexamination:Salmonella2010-03-26发布2010-06-01实施中华人民共和国卫生部发布GB4789.4—2010前言本标准代替GB/T4789.4-2008《食品卫生微生物学检验沙门氏菌检验》。本标准与GB/T4789.4-2008相比，主要变化如下：——修改了标准的中英文名称；——修改了标准的范围；——修改了培养

2、基和试剂；——修改了设备和材料；——修改了附录A。本标准的附录A、附录B为规范性附录。本标准所代替的历次版本发布情况为：——GB4789.4-84、GB4789.4-1994、GB/T4789.4-2003、GB/T4789.4-2008。IGB4789.4—2010食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验1范围本标准规定了食品中沙门氏菌（Salmonella）的检验方法。本标准适用于食品中沙门氏菌的检验。2设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：2.1冰箱：2℃～5℃。2.2恒温培养箱：36

3、℃±1℃，42℃±1℃。2.3均质器。2.4振荡器。2.5电子天平：感量0.1g。2.6无菌锥形瓶:容量500mL，250mL。2.7无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。2.8无菌培养皿：直径90mm。2.9无菌试管：3mm×50mm、10mm×75mm。2.10无菌毛细管。2.11pH计或pH比色管或精密pH试纸。2.12全自动微生物生化鉴定系统。3培养基和试剂3.1缓冲蛋白胨水（BPW）：见附录A中A.1。3.2四硫磺酸钠煌绿（TTB）增菌液：见附录A中A.2。3.3

4、亚硒酸盐胱氨酸（SC）增菌液：见附录A中A.3。3.4亚硫酸铋（BS）琼脂：见附录A中A.4。3.5HE琼脂：见附录A中A.5。3.6木糖赖氨酸脱氧胆盐（XLD）琼脂：见附录A中A.6。1GB4789.4—20103.7沙门氏菌属显色培养基。3.8三糖铁（TSI）琼脂：见附录A中A.7。3.9蛋白胨水、靛基质试剂：见附录A中A.8。3.10尿素琼脂（pH7.2）：见附录A中A.9。3.11氰化钾（KCN）培养基：见附录A中A.10。3.12赖氨酸脱羧酶试验培养基：见附录A中A.11。3.13糖发酵管：见附录A中A.12。3

5、.14邻硝基酚β-D半乳糖苷（ONPG）培养基：见附录A中A.13。3.15半固体琼脂：见附录A中A.14。3.16丙二酸钠培养基：见附录A中A.15。3.17沙门氏菌O和H诊断血清。3.18生化鉴定试剂盒。2GB4789.4—20104检验程序沙门氏菌检验程序见图1。检样25g（mL）样品+225mLBPW36℃±1℃，8h～18h1mL+TTB10mL1mL+SC10mL42℃±1℃，18h～24h36℃±1℃，18h～24hBSXLD（或HE、显色培养基）36℃±1℃，40h～48h36℃±1℃，18h～24h挑取可

6、疑菌落TSI，赖氨酸，NA，靛基质，尿素(pH7.2)，KCN生化鉴定试剂盒或全H2S+靛基质-H2S+靛基质+H2S-靛基质-尿反应结果与左自动微生物生化鉴定尿素-KCN-尿素-KCN-素-KCN-侧描述不符系统+赖氨酸+赖氨酸+赖氨酸+/-甘露醇+、山梨醇+ONPG-沙门氏菌，血清学试验非沙门氏菌报告图1沙门氏菌检验程序5操作步骤5.1前增菌称取25g（mL）样品放入盛有225mLBPW的无菌均质杯中，以8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或置于盛有225mLBPW的无菌均质袋中，用拍击式均

7、质器拍打1min～2min。若样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需测定pH值，用1mol/mL无菌NaOH或HCl调pH至6.8±0.2。3GB4789.4—2010无菌操作将样品转至500mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于36℃±1℃培养8h～18h。如为冷冻产品,应在45℃以下不超过15min,或2℃～5℃不超过18h解冻。5.2增菌轻轻摇动培养过的样品混合物，移取1mL，转种于10mLTTB内，于42℃±1℃培养18h～24h。同时，另取1mL，转种于10mLSC内，于36℃±1℃培养18h～24h。5

8、.3分离分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板（或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培养基平板）。于36℃±1℃分别培养18h～24h（XLD琼脂平板、HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培养基平板）或40h～48h（BS琼脂平板），观察各个平板上生长的菌落,各个平板上的菌落特征见表