高效液相色谱法测定海水中游离态腐胺、亚精胺和精胺.pdf

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第10期2010年l0月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1445—1449DOI：10．3724／SP．J．1096．2010．01445高效液相色谱法测定海水中游离态腐胺、亚精胺和精胺付敏，赵卫红苗辉吕桂才(中国科学院海洋研究所海洋生态与环境科学重点实验室，青岛266071)(中国科学院研究生院，北京100049)(中国海洋大学海洋化学理论与工程技术教育部重点实验室，青岛266100)摘要使用高效液相色谱法测定海水中3种游离态多胺(腐胺、

2、亚精胺和精胺)。海水样品经HCIO溶液酸化，丹磺酰氯衍生化，ODS色谱柱(150mm×4．6milli．d．，5Ixm)分离，以0．1mol／L乙酸铵和乙腈为流动相梯度淋洗，流速为1．0mL／min，荧光检测(激发波长：340r／m；发射波长：515nm)。本实验中腐胺、亚精胺和精胺的检出限(S／N=3)分别为9．6×10‘，2．8×10。和1．0×10。mol／L。在1×10一一1×10moL／L范围内，3种多胺的浓度和荧光信号值均呈良好的线性关系(R>0．99)。海水样品添加浓度在5×10一，1×10～，2．5×10和5×

3、10mol／L的回收率为84．9％～110．9％；衍生方法的相对标准偏差<3．6％，本方法中多胺衍生物不需要用有机溶剂萃取，衍生后可直接进样分析，避免了萃取过程中多胺的损失，极大地提高了分析速度。本方法具有选择性高，样品用量少，灵敏度好等特点，适合海水中游离态腐胺、亚精胺和精胺的痕量分析。关键词高效液相色谱；海水；腐胺；亚精胺；精胺1引言多胺(Polyamines，PA)是带有两个或两个以上氨基的脂肪族化合物，在生物体内广泛存在。最常见的多胺有腐胺(Putrescine，Put)、亚精胺(Spermidine，Spd)和精胺(

4、Spermine，Spm)等。多胺广泛存在于植物¨．2j、动物、浮游植物以及海藻中，作为生物体内促进细胞生长的重要物质之一，对细胞生长、细胞增殖起着关键性的作用，能直接参与生物体内的多种生理活动，是生物体生长和细胞代谢所必需的痕量生物活性物质。有研究显示，海水中的多胺可以刺激一些赤潮藻的生长，可能是诱导赤潮暴发的关键因子J。要了解海水中多胺对赤潮藻生长所起的作用，则需要建立一种方便、准确地测定海水中多胺的方法。目前，测定多胺的方法有气相色谱法、薄层色谱法、高效液相色谱法、电泳法等，其中高效液相色谱法(HPLC)应用最广_】。多

5、胺的HPLC测定方法报道多集中于血清、尿液12]、唾液[1和细胞H等方面，目前仅有少数文献报道了HPLC测定海水中多胺的方法。Nishibori等分别采用柱前苯甲酰衍生化ODS柱HPLC紫外检测法¨和阳离子交换柱HPLC荧光检测法J6I。测定了海水中多胺；张琳等采用氯甲酸-9．芴甲酯柱前衍生HPLC荧光检测法测定了海水中18种脂肪胺类化合物¨。本实验采用不同于前述的方法，前处理方法简单，测定灵敏度高。样品经丹磺酰氯(DNS—C1)衍生后，多胺衍生物不需要用有机溶剂萃取、浓缩等步骤，避免了萃取过程中多胺的损失，也极大地提高了分析

6、速度。本方法具有选择性高，样品用量少，适合痕量分析等优点，能对海水中3种游离态多胺(腐胺、亚精胺和精胺)进行很好的定量分析。2实验部分2．1仪器与试剂Waterse2695高效液相色谱仪、Waterse2475荧光检测器(美国Waters公司)，Empower色谱工作站；旋2010-03-04收稿；2010-04-06接受本文系国家自然科学基金项目(No．40976047)、海洋化学理论与工程技术教育部重点实验室开放基金项目资助}E—mail：whzhao@ms．qdio．ae．ca分析化学第38卷涡混合震荡器(德国IKA-l

7、abDancer公司)；KQ—IOOTDE型超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)；pH计(上海雷磁仪器厂)；HH—s4型数显恒温水浴锅(金坛公司)；GF／F玻璃纤维滤膜(Whatman公司)。腐胺(I>98％)、亚精胺(I>98％)、精胺(／>97％)和丹磺酰氯(i>99％)均购自美国Sigma公司；乙腈和丙酮(色谱纯，Burdick&Jackson公司)；l，6．己二胺及其它试剂均为分析纯；实验用水为Milli—Q水。2．2标准储备溶液的配制称取3种多胺标准品及内标(1，6一己二胺)，配制成1．0mmol／L的标准储备液。称

8、取适量丹磺酰氯，用丙酮配制成6g／L的储备液。以上溶液均于一20℃冰箱冷冻储存。2．3混合标准溶液的配制将标准储备溶液解冻，分别移取适量3种多胺标准储备溶液于棕色容量瓶中，用人工海水定容，用于工作曲线实验，测定前配制。2．4样品预处理及保存测定海水中游离态多胺，样品需经GF／