鹅坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅰ的原核表达及免疫原性鉴定.pdf

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1、南方农业学报joumalofSouthemAgTiculture2014，45(12)：2259—2263ISSN2095一l191：CODENNNXAABDOI：10．3969／j：issfl．2095—1191．2014．12．2259http：／／www．1lfhy】【b．cn鹅坦布苏病毒E蛋白结构域I的原核表达及免疫原性鉴定赵冬敏，黄欣梅，刘宇卓，韩凯凯，杨婧，谢星星，刘晓燕，李银+(江苏省农业科学院兽医研究所／国家兽用生物制品工程技术研究中心／农业部兽用生物制品工程技术重点实验室，南京2l0014)摘要：【目的】明确鹅坦布苏病毒(GTuMv)E蛋

2、白结构域I的原核表达及免疫原性，为进一步研究GTMuvE蛋白结构的生物学特性、免疫学功能等奠定基础。【方法】通过人工合成方法获得GTMIⅣE蛋白结构域I的编码基因(E瑾因)，并与携带GsT标签的pGEx一4t—l载体连接，转人大肠杆菌后经诱导表达获得融合蛋白，并以、Ⅳes把mblotting鉴定融合蛋白是否有免疫原性。【结果】合成获得的EJ基因片段为411bp，将其插入pGEx一4t一1载体可构建重组表达质粒pGEx一4t—1．EL阳性重组菌经lmmol几口TG诱导5h后，融合蛋白的表达量达最高峰，且以包涵体形式存在，分子量约41．OkDa。westemb

3、lotting鉴定结果显示，融合蛋白与GST标签抗体和E蛋白阳性血清均可发生特异性反应，检测到预期的目的条带。【结论】GTMI『vE蛋白结构域I可在大肠杆菌中成功诱导表达，且获得的融合蛋白具有良好的免疫原性，可用于GTM【Ⅳ血清学检测试剂盒的研发。关键词：鹅坦布苏病毒；E蛋白；结构域I；原核表达；免疫原性中图分类号：S858．33文献标志码：A文章编号：2095—1191(2014)12—2259—051h1J●●1●●J●1J●一J●nrr0KarV0tlCeXDreSSlonannlmmUnogenlCltVldennIlCanon0lgoosetem

4、busuVirusEproteindomainIZHAODong—min，HUANGXin—mei，LIUYu—zhuo，HANKai—kai，YANGJing，XIEXing—xing，LIUXiao—yan，LIYin4(InstituteofVeterinaryScience，JiangsuAcademyofAgricultumlSciences悄ationalCenterforEngineeringResearchofVeterinaryBio—products／KeyLabomtDryofVeterinaryBiologicalEngineeri

5、ngandTechnology，MinistryofAgricu】ture，Nanjing210014，China)Abstract：【0bjective】nleprokaryoticexpressionandimmunogenicityofgoosetembusuvirus(GTMUV)Eprotejndomain1wereidenti6edinordertolaythefoundationforfurtherresearchesonbi0109icalcharacteristicsandimmllno—lo百calfunctionofEproteind

6、omainIinGTMuV．【Melhod】Theencodinggene(Er)ofGTMuVEproteindomain1wasarti6ciallysvnthesisedandwasinsertedintovectorpGEX一4t一1withGSTtag．ThenlheI℃combinantplasmidwastIans．formedint0Eschedch西coji．Throu小inducedexpression，thefusionproteinwasobtainedanditsimmuno赡nicitvwas1dentinedbyusingwe

7、sternblotting．【Result】TheobtainedgenefragmentEjwas4llbpinlength．ThroughinsertingintovectorpGEX一4t一1，therecombinantexpressionplasmidpCEX一4t—l—EJwasconstn】ctedsucccssfully．、耵henposi．tiverecombinantstminwasinducedwi山1mmol／LIPTG，theexpressionquantitvoffusiDnpmteinreachedthepeakaftef5h

8、ours．Thefhsionproteinexistedasinc