鹅坦布苏病毒E蛋白结构域Ⅲ的原核表达及抗原性分析.pdf

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1、南方农业学报JournalofSouthemAgnculture2015，46(1)：150—154ISSN2095—1191；CODENNNXAABhttp：／／www．nfnyxb．cnDOI：10．3969／j：issn．2095-1191．2015．1．150鹅坦布苏病毒E蛋白结构域III的原核表达及抗原性分析黄欣梅，赵冬敏，刘宇卓，杨婧，韩凯凯，李银+(江苏省农业科学院兽医研究所／国家兽用生物制品工程技术研究中心／农业部兽用生物制品工程技术重点实验室，南京210014)摘要：【目的】获得鹅坦布苏病毒(GTMIⅣ)E蛋白结

2、构域Ⅲ的原核表达重组蛋白并明确其免疫原性，为进一步研究其生物学功能及研制亚单位疫苗奠定基础。【方法】根据GenBank中GTMUVJS804株E蛋白结构域ⅡI的同源基因序列设计1对引物，在其两端力t1．A．Flag标签序列和酶切位点，采用PCR扩增GTMUV的E蛋白结构域ⅡI基因(EH／)，然后与pET32a原核表达载体连接构建重组表达质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)后用IPTG诱导融合蛋白表达，并以Westernblotting鉴定其免疫原性。【结果】PCR扩增获得携带Flagb示签序列的E／／／基因片段约430bp，将其插

3、，KpET32a载体可成功构建重组质粒pET32a—EH／o阳性重组菌经口TG诱导表达5hill]可得到融合蛋白，分子质量约33．0kDa，主要以包涵体形式存在。Westernblotting鉴定结果显示，融合蛋白与抗Flag标签单克隆抗体、小鼠抗坦布苏病毒多克隆抗体均可发生特异性反应，检测到预期的目的条带。【结论】GTMUVE蛋白结构域III能在大肠杆菌中成功诱导表达，且获得的融合蛋白具有良好的免疫原性，可用于研制GTMIⅣ诊断抗原和亚单位疫苗。关键词：鹅坦布苏病毒；E蛋白；结构域flI；原核表达；免疫原性中图分类号：$855。

4、33文献标志码：A文章编号：2095—1191(2015)Ol一0150—051h●-●●1·■●l■n1n●rr0KaryoticeXpresslonannantil巨enicanalysisotEproteindomainIIIingoosetembusuvirusHUANGXin—mei，ZHAODong—min，LIUYu—zhuo，YANGJing，HANKai—kai，LIYin+(InstituteofVeterinaryMedicine，JiangsuAcademyofAgriculturalSciences／Ke

5、yLaboratoryofVeterinaryBiologicalsEngineeringandTechnology／NationalCenterforEngineeringResearchofVeterinaryBio-produets，MinistryofAgriculture，Nanjing210014，China)Abstract：【Objective】Theprokaryoticexpressionandimmunogenicityofgoosetembusuvirus(GTMUV)Eproteindomain111we

6、reidentifiedinorderto1aythefoundationforfurtherresearchesonthebielogicalfunefionandsubunitvaccinedevelopmentofEproteindomainIIIinGTMuV．【Method】AccordingtohomologousgeneofEproteindomainIIIinGTMUVJS804strainfromGenBank．apairofprimerswithFlagtagsequenceandenzymedigestion

7、sitesatbothendswasdesignedtoamplifyEproteindomainIIIgene(脚)byusingPCRtechnique．ThePCRproduct(EIII)wasin．sertedintoprokaryoticexpressionvectorpET32atoconstructrecombinantexpressionplasmidwhichthenwastransformedintoE．coliBL21(DE3)．ThroughinductionwithI胛G．thefusionprotei

8、nwasexpressedinordertoidentifvitsimmunoreactivitybyusingWesternblotting．【Result】弧eobtained脚genefragmentwithFlagtagsequencewa