黑皮果蔗花叶病病原鉴定.pdf

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1、广西农业科学2010。41(3)：223—225GmgxiAgficuhandSciences·223·黑皮果蔗花叶病病原鉴定秦碧霞1一，蔡健和1，莫磊兴2一，魏源文4，刘志明1，朱桂宁t，陆秀红1(1广西农业科学院植物保护研究所；2农业部甘蔗品质监督检验测试中心；3广西甘蔗研究所；4广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室：南宁530∞7)摘要：在南宁市郊采集到l份表现褪绿条纹、花叶的黑皮果蔗样品(NN—Ba2)，经差速离心和PEG-"次沉淀法提取病毒粗汁液，在电镜下观察到略弯曲的线状病毒粒子；

2、DAC—ELISA检测显示NN—Ba2与甘蔗花叶病毒多克隆抗体和单克隆抗体呈阳性反应；根据SCMV和SrMVCP基因分别设计合成特异引物，利用RT—PCR对NN—Ba2进行分子鉴定，扩增出大小约900bp的预期片段，健康对照未扩增到任何片段；NN—Ba2扩增片段经克隆后测序得到719个有效核苷酸，测序结果在DDBJ上用BLASl．进行同源性分析，结果显示该序列与已报道的SCMV广东、云南、广西等地分离物对应的核苷酸序列同源性为97．36％～97．77％，根据马铃薯Y病毒科(Potyviridae

3、)病毒种和株系的划分标准，NN—Ba2鉴定为SCMV。田间采集的另外lO份表现花叶症状的果蔗样品经ELISA和RT-PCR检测，证明也感染了SCMV。关键词：黑皮果蔗；果蔗花叶病毒；PCR鉴定中图分类号：S435．66l文献标识码：A文章编号：1002—8161(2010)03-0223-03IdentificationofmosaicdiseasepathogeninchewingcanebadilaQINBi-xial一，CAIJian-hel，MOLei-xin92’3WEIYuan-we

4、n4，LIUZhi—min91，ZHUGui-nin91，LUXiu-hon91(1PlantProtectionResearchInstitute，GuangxiAcademyofAgriculturalSciences，Nanning530007，China；2TheSugarcaneQualit)rSupervisionandTestingCenteroftheMinistryofAgriculture，Nanning530007，China；3GnaIlgxiSugarcaneResea

5、rchInstitute，Nanning530007，China；4GuangxiCropGeneticImprovementandBiotechnologyLaboratory，Nanning530007，China)．Abstract：Asampleofleavesfromchewingcanebadih(NN-Ba2)showingchlorotiestripeandmosaicsymptomsWaScollectedfromNanningsuburb．Viruswagpurifiedfr

6、omtheinfectedleavesbythemethodofdifferentialeentTifugationandsecondaryPEGsedimentation．SiJighflyconvexfilamentousparticleswereobservedunderelectronmicroscope．111eresultsofDAC—EUSAteatindicatedthattheviresisolateshowedpositivereactionwithpolyclonalant

7、ibodyandmonoclonalantibodyofsugarcanemosaicvirus(SCMV)．A900bp矗agmentWasobtainedbyRT-PCRusingspecificprimersbasedonthecoatproteingeneofSCMVandsorghummosaicvirus(SrMV)，respectively，butnofragmentWasamplifiedinthecontr01．Nucleotidesequenceanalysisindicat

8、edthatthefragmentcontained719nucleotides．HomologyanalysisusingtheBLASTshowedthattlIeisolatehad97．36％一97．77％nucleotidesequencehomologycomparedwithisolatesseparatedfromGuangdong．YunnanandGuangxi．111eisolateWasidentified鹅SCMVaccordingtotheclassifiedstan