黑皮果蔗Badila组织培养与脱毒研究

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1、单位代码10602学号2015011134分类号Q945.39密级公开硕士学位论文黑皮果蔗Badila组织培养与脱毒研究StudyonTissueCultureandDetoxificationofSugarcaneBadila学院：生命科学学院学科名称：植物学研究方向：植物生理学年级：2015级研究生：梁丽君指导教师：李伯林副教授完成日期：2018年6月黑皮果蔗Badila组织培养与脱毒研究研究生：梁丽君年级：2015级导师：李伯林副教授学科专业：生物学研究方向：植物学摘要研究以广东当家品种黑

2、皮果蔗（Badila）为材料，以黑皮果蔗幼嫩心叶和茎尖分生组织为外植体。第一阶段，通过直接诱导黑皮果蔗幼嫩心叶愈伤组织分化成苗，从愈伤组织诱导、分化及丛生芽苗增殖等方面，探究黑皮果蔗组织培养过程中，适宜的培养基配方与激素配比。第二阶段，对黑皮蔗腋芽与组培苗进行不同条件热处理，比较果蔗腋芽与组培苗生长状况，茎尖存活状况、茎尖愈伤组织诱导与茎尖芽苗生长状况，比较不同热处理对黑皮果蔗腋芽与组培苗茎尖脱毒的影响。为黑皮果蔗品种的改良提供一些理论依据。研究结果如下：1黑皮果蔗组培苗诱导试验结果：(1)黑皮

3、果蔗幼嫩心叶愈伤组织诱导试验中，以MS+2,4-D1.5~3.0mg/L范围浓度最佳，出愈率为87.5%，愈伤组织出愈率最高，呈淡黄色颗粒松散状，质量最好。黑皮果蔗愈伤组织增殖试验中，适宜的2,4-D与NAA组合可以有效促进愈伤组织生长，以MS+2,4-D2.0mg/+NAA0.01~0.05mg/L培养基最佳，愈伤组织呈白色或淡黄色，颗粒松散，质地均匀，增殖系数最高，达4.88。(2)果蔗愈伤组织分化试验中，6-BA与NAA激素组合诱导，愈伤组织分化率较单独添加6-BA时显著提高，丛生芽苗生长

4、状况良好。当添加MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L激素配比时，黑皮果蔗愈伤组织的分化率最高，达95%，得到的丛生芽苗，长势好，直立，叶片浓绿，芽苗高壮，芽苗高度大于2cm。(3)黑皮果蔗丛生芽苗增殖试验中，向MS培养基中单独添加6-BA浓度为1.0~2.0mg/L时，黑皮果蔗丛生芽苗增殖系数最高，达4.95，丛生芽苗高壮，多分蘖，无玻璃化现象。2黑皮果蔗组培苗脱毒试验结果：(1)不同热处理条件处理黑皮果蔗腋芽试验中，黑皮果蔗腋芽在温度48℃水浴10min条件下，腋芽萌发率最高，为

5、93.33%，萌发的腋芽粗壮，叶色浓绿，带有2~3片幼叶，芽苗平均高度≧10cm。(2)不同热处理条件对黑皮果蔗组培苗生长状况试验中，黑皮果蔗组培苗以温度30℃培养25d，存活率最高为95%，组培苗直立粗壮，长势良好。宜做茎尖分生组织I剥取材料。(3)黑皮果蔗茎尖大小直接决定茎尖愈伤组织诱导的难易程度。不同茎尖大小在相同热处理条件下，以剥取1.0mm茎尖大小，愈伤组织出愈率最高，达83.33%。(4)黑皮果蔗组培苗茎尖愈伤组织诱导最佳培养基配方为：MS+2,4-D1.5mg/L，茎尖愈伤组织出愈

6、率为96.67%。(5)黑皮果蔗组培苗茎尖成苗最佳培养基配方：6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，组合诱导茎尖直接成苗，可以得到叶色浓绿，粗壮，长势良好的单株芽，分化率为96.67%。(6)本研究所有热处理条件下，剥取大小0.3mm茎尖，诱导茎尖愈伤组织，茎分化培养培养得到的茎尖苗，经PCR技术检测，结果显示高粱花叶病毒（Sorghummosaicvirus，SRMV）与甘蔗花叶病毒（Sugaeranemosiacviurs，SCMV）两种病毒脱毒率达到100%。(7)黑皮果蔗茎尖丛生

7、芽苗不定根诱导，最佳培养基配方为：MS+NAA2.0mg/l+IBA0.5mg/l+PP3330.5mg/l+0.1%AC，不定根诱导效果最佳，平均根数达到6.15根/株，根系粗壮，侧根多，茎尖丛生芽长势良好。关键词：愈伤组织；茎尖脱毒；组培培养；甘蔗IIStudyonTissueCultureandDetoxificationofSugarcaneBadilaMasterStudent:Lijun-LiangGrade:2015Supervisor:Bolin-LiMajor:BiologyR

8、esearchDirection:BotanyAbstractThestudywasbasedontheBadila,thedominantspeciesinGuangdongprovince,andtheyoungleavesandstemapicalmeristemsasexplants.Inthefirststage,inductionofthecallusdifferentiationintoseedlings,thecallusinduction,differentiation,and