HIV初筛实验室标准操作规程.doc

《HIV初筛实验室标准操作规程.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、HIV初筛实验室标准操作规程人类免疫缺陷病毒（HIV）1+2型抗体酶联免疫原理和方法（上海科华生物）原理：用HIV-1+2型抗原包被酶联板。待检血清或血浆中的抗-HIV抗体与包被抗原反应，再与酶标HIV-1+2型抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物。加底物（TMB）显色，在酶标仪上测定后根据OD值判定有无HIV抗体的存在。操作步骤：1、取出HIV抗原包被板。每次试验设空白对照1孔，阴性对照各1孔，阳性对照各3孔（其中阳性对照1两孔，阳性对照2一孔），质控一孔。分别加入HIV阴、阳性对照质控血清各100微升，其余孔加入待检样

2、本各100微升。贴上封口胶，置37℃温育60分钟。2、将浓缩洗液用纯化水25倍稀释后洗涤用。3、弃去各孔中样品、拍干。每孔加满洗液，静置数秒后弃去，如此重复洗5次，拍干。4、每孔加入酶标抗原工作液100微升，贴上封口胶。37℃温育30分钟。5、弃去各孔中酶液，用洗液反复洗涤5次（操作同步骤3）。6、每孔加入底物液A50微升，再加入底物液B50微升，轻拍混匀，置37℃避光显色30分钟。7、显色完毕后，每孔加入终止液50微升，轻拍混匀，置酶标仪450nm波长处测定OD值（参考波长为630nm）。结果判定：阴、阳性对照和被检样本的O

3、D值减去空白对照OD值即为计算值。2、若阴性对照OD均值小于0.02按0.02计算。3、临界值（cutoff值）的设定：cutoff值=PCx×10%（若PCx>=2.5按2.5算）4、被检样本的OD值≥临界值应判为HIV抗体阳性反应，<临界值为阴性反应。检测样本的OD值≥临界值判为HIV抗体阳性，应重新取样双孔复试，复试阳性者应按照“全国HIV检测管理规范”送“HIV确认实验室”进行确认实验。注意事项：1、本试剂的使用单位必须是当地卫生行政部门批准的HIV初筛实验室。2、整个HIV检测必须符合《全国艾滋病检测工作规范》严格防

4、止交叉感染。操作时必须戴手套，穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度。3、HIV-1/HIV-2抗体测定结果的判定必须以酶标仪读数为准。1、各步加液均应作用加样器，并经常校对其准确性。2、洗涤时各孔均需加满洗液，防止孔口有游离酶不能洗净。3、所有样品、洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。4、微孔板从冷藏环境中取出时应将试剂平平衡至室温方可使用，未用完者须放入有干燥剂的密封袋中保存。5、用于检测的样品应保持新鲜。6、剩余样品及废弃物应经121℃高压蒸气灭菌30分钟，或用5.0g/L次氯酸钠等消毒剂处理30分钟后废弃。7、不同批号试

5、剂组分不得混用。