液相出峰异常解决方法.doc

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1、高效液相出峰异常解决方法一、保留时间变化可能的原因:解决方法1.柱温变化:柱恒温2.等度与梯度间未能充分平衡:至少用10倍柱体积的流动相平衡柱3.缓冲液容量不够:用>25mmol/L的缓冲液4.色谱柱污染:每天冲洗柱5.柱内条件变化:稳定进样条件，调节流动相6.色谱柱快达到寿命:采用保护柱二、保留时间缩短可能的原因:解决方法1.流速增加:检查泵，重新设定流速2.样品超载:降低样品量3.键合相流失:流动相PH值保持在3~7.5，检查柱的方向4.流动相组成变化:防止流动相蒸发或沉淀5.温度增加:柱恒温三、保留时间延长可能的原因:解决方法1.流速下降:管路泄漏,更换泵密

2、封圈,排除泵内气泡2.硅胶柱上活性点变化:用流动相改性剂，如加三乙胺，或采用碱钝化柱3.键合相流失:流动相PH值保持在3~7.5检查柱的方向4.流动相组成变化:防止流动相蒸发或沉淀5.温度降低:柱恒温四、出现肩峰或分叉可能的原因:解决方法1.样品体积过大:用流动相配样，总的样品体积小于第一峰的15%2.样品溶剂过强:采用较弱的样品溶剂3.柱塌陷或形成短路通道:更换色谱柱，采用较弱腐蚀性条件4.柱内烧结不锈钢失效:更换烧结不锈钢，加在线过滤器，过滤样品5.进样器损坏:更换进样器转子五、鬼峰可能的原因:解决方法1.进样阀残余峰:每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清

3、洗2.样品中未知物:处理样品3.柱未平衡:重新平衡柱，用流动相作样品溶剂(尤其是离子对色谱)4.三氟乙酸(TFA)氧化(肽谱):每天新配，用抗氧化剂5.水污染(反相):通过变化平衡时间检查水质量，用HPLC级的水六、基线噪声可能的原因:解决方法1.气泡(尖锐峰):流动相脱气，加柱后背压2.污染(随机噪声):清洗柱，净化样品，用HPLC级试剂3.检测器灯连续噪声:更换氘灯4.电干扰(偶然噪声):采用稳压电源，检查干扰的来源(如水浴等)5.检测器中有气泡:流动相脱气，加柱后背压七、峰拖尾可能的原因:解决方法1.柱超载:降低样品量，增加柱直径采用较高容量的固定相2.峰干

4、扰:清洁样品，调整流动相3.硅羟基作用：加三乙胺，用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值，钝化样品4.柱内烧结不锈钢失效:更换烧结不锈钢，加在线过滤器，过滤样品5.柱塌陷或形成短路通道:更换色谱柱，采用较弱腐蚀性条件6.死体积或柱外体积过大:连接点降至最低，对所有连接点作合适调整，尽可能采用细内径的连接管7.柱效下降:用较低腐蚀条件，更换柱，采用保护柱八、峰展宽可能的原因:解决方法1.进样体积过大:用流动相配样，总的样品体积小于第一峰的15%2.在进样阀中造成峰扩展:进样前后排出气泡以降低扩散3.数据系统采样速率太慢:设定速率应是每峰大于10点4.检测器

5、时间常数过大:设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高:增加柱温，采用低粘度流动相6.检测池体积过大:用小体积池，卸下热交换器7.保留时间过长:等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8.色谱柱外体积过大:将连接管径和连接管长度降至最小9.样品过载:进小浓度小体积样品