高中生物选修三专题1基因工程复习课件.ppt

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1、☆选修3现代生物科技专题☆专题1基因工程一、基因工程的工具及其操作程序1．基因工程的基本工具作用作用部位限制酶DNA连接酶载体切割目的基因和载体连接DNA片段，形成重组DNA携带目的基因进入受体细胞核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形成的磷酸二酯键限制酶DNA连接酶载体作用特点(条件)常用类型学.科.网zxxk.(1)识别特定的核苷酸序列(2)在特定位点上切割(1)E·coliDNA连接酶只连接黏性末端(2)T4DNA连接酶连接黏性末端和平末端(1)能在宿主细胞内稳定存在并大量复制(2)有多个限制酶切割位点(3)具有特殊的标记基因EcoRⅠ限制酶

2、SmaⅠ限制酶E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶质粒、噬菌体、动植物病毒1.限制酶不切割自身DNA的原因是：原核生物不存在该酶的识别序列或识别序列已经被修饰。2.DNA连接酶起作用时不需要模板。2.载体(1)作用①将目的基因转移到宿主细胞内。②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。(2)具备的条件①能在宿主细胞内稳定保存并大量复制。②有多个限制酶切割位点。③具有特殊的标记基因，以便进行筛选。【例1】(2010·江苏高考·T27)下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题

3、：限制酶BamHⅠHindⅢEcoRⅠSmaⅠ识别序列及切割位点G↓GATCCCCTAG↑GA↓AGCTTTTCGA↑AG↓AATTCCTTAA↑GCCC↓GGGGGG↑CCC(1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有________个游离的磷酸基团。(2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________。(3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是________________。(4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和HindⅢ两种限制酶同时处理质粒

4、、外源DNA的优点在于可以防止________。限制酶BamHⅠHindⅢEcoRⅠSmaⅠ识别序列及切割位点G↓GATCCCCTAG↑GA↓AGCTTTTCGA↑AG↓AATTCCTTAA↑GCCC↓GGGGGG↑CCC0,2高SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化(5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入________________酶。(6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了________。(7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质

5、粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在________________________的培养基因培养，以完成目的基因表达的初步检测。限制酶BamHⅠHindⅢEcoRⅠSmaⅠ识别序列及切割位点G↓GATCCCCTAG↑GA↓AGCTTTTCGA↑AG↓AATTCCTTAA↑GCCC↓GGGGGG↑CCCDNA连接鉴别和筛选含有目的基因的细胞蔗糖为唯一含碳营养物质1.获取目的基因和切割载体时使用同一种限制酶，目的是产生相同的黏性末端。2.获取一个目的基因需限制酶切割两次，共产生4个黏性末端或平末端。3.限制酶切割位点的选择必须保

6、证标记基因的完整性，以便于检测和筛选。学.科.网zxxk.2.基因工程的基本操作程序(1)目的基因的获取①从基因文库中获取目的基因优点：有了基因文库，就可以随时从中提取所需要的目的基因，引入受体细胞使之表达。目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定②人工合成目的基因③利用PCR技术扩增目的基因a．PCR：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。PCR扩增是获取目的基因的一种非常有用的方法，也是进行分子鉴定和检测的一种很灵敏的方法。b．目的：通过指数式扩增获取大量的目的基因。(2)基因表达

7、载体的构建学.科.网zxxk.①目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并可以遗传给下一代，并使目的基因能够表达和发挥作用。(2)基因表达载体的构建方法(1)一般来说，天然载体往往不能满足人类的所有要求，因此人们根据不同的目的和需要，需要对某些天然的载体进行人工改造。(2)插入的目的基因的表达需要调控序列，因而用作载体的质粒的插入部位之前需有启动子，之后需有终止子。1．(2009年潍坊模拟)质粒作为“分子运输车”的条件是()①能够自我复制②双链环状DNA分子③有多个限制酶切点④有标记基因⑤真核细胞中没有A．①②③④⑤B．①②③④C．①③④

8、D．②③⑤【答案】C2．(2009年南通调研)下列关于基因表达载体构建的相关叙述，不正确的是()A．需要限制酶和DNA连接酶B．必须在细胞内进行C．抗生素抗性基因可作为标记基因D．启动子位于目的基因的首端【