资源描述:
《分子遗传学11.DNA复制B.ppt》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、1968年Gilbert提出滚环复制模型:(1)共价延伸;(2)模板链和新合成的链分开;(3)不需RNA引物,在正链3‘-OH上延(4)只有一个复制叉;(5)形成多联体(concatemer);滚环复制的电镜照片哪些DNA进行滚环复制?真核rDNA的扩增,F因子DNA的转移,λ裂解途经的复制,φX174,M13.G4等单链环状DNA噬菌体第二阶段复制都是进行滚环复制的.二.DNA末端起始复制线性双链DNA的复制有的是从一端开始的:腺病毒(Adenovirus)φ29DNAs脊髓灰质病毒(poliovirus)腺病毒DNA全长35937bp,线性双链,两端各有反向重复顺序103~16
2、2bp,两末端各有50bp为复制起点。其复制是以单链置换(stranddisplacement)形成一个大的茎环或叫平锅形结构来进行的。三.复制的终止1.E.coli的复制终止现已发现有两个终止区域(terE,D,A和terC,B),位于相遇点的另一侧100Kb处。每一终止顺序对某一方向移动的复制叉来说是特异的。ter顺序有一个23bp的区域,在体外可导致复制的终止,但其功能显示了一定的方向性。终止需要tus(terminusutilizationsubstance)基因的产物Tus(36kD),Tus能识别ter保守顺序,并阻止复制叉继续前进。ter-Tus复合物可能通过抑制螺旋
3、酶来实行终止第六节复制的过程一.半不连续复制E.colidUTPase,它能使dUTP变成dUMP,dUMP是不能作为DNA合成的底物,这样它就不再能加入DNA中。尿嘧啶N-糖苷酶(uracilN-glycosylase),它可以切断混合尿苷的糖苷键,形成无Pu和Py位点(apurinicorapyrimidinic,AP),再由AP内切酶在AP位点切出一个缺口,进一步进行切除修复。以下实验证实了这个解释:(1)在dut-突变体(dUTPase缺失)中冈崎片段比在dut+中为短。这是因为U掺入机会增加;(2)在ung-(尿嘧啶N-糖苷酶缺失)突变体中,新合成的DNA约有一半由片段组
4、成。(3)因为尿嘧啶N-糖苷酶缺失,不会切除U的糖苷链,也就不会出现AP位点,所以碱沉淀时不易断裂,从而保持了半不连续的原貌。在dut-,ung-双突变体中,结果和实验(2)相同,更进一步证实了此推测。酵母的自主复制区ARS(autonomouslyreplicationgsequence)发挥复制起点的功能,但是过量的。酵母染色体Ⅳ的着丝粒附近为ARS1序列ARS1分为A,B,C三个功能区,A,B起主要作用,C起次要作用。A区为15bp,其中11个保守,称ACS(ARSconsensussequence)。有复制起始子的功能B区约为80bp,含B1,B2,B3三个功能区。B3是A
5、BF1(ARS-bindingfactor1)结合区,酵母的复制ORC:由6个亚基组成相当于DnaA和λ的O蛋白,与A/B1结合,结合于游离的DNACdc6:相当于DnaC,及λ的P蛋白,使Mcm蛋白结合到复合体上。此对在Origin上起始复制是必须的。Mcm:DnaB螺旋酶。即licensingfactorABF1(转录因子)结合于B3原核和真核生物复制体系的比较E.coliλSV40/人酵母功能DnaAOT抗原ORC起始蛋白DnaBDnaBT抗原MCM解旋酶DnaCP?Cdc6装配因子DnaGDnaGPolα-引发酶Polα-引发酶引发酶PolⅢ的α亚基PolδPolδ,Pol
6、ε聚合酶PolⅢ的ε亚基PolδPolδ,Polε校正PolⅢ的亚基PCNAPCNA滑动钳复合体RF-CRF-C滑动钳装配器SSBRF-ARF-A单链结合蛋白PvuBg1BamH1BampBR322TELTEL四膜虫rDNAARSPvuBg1BamH连接Pvu转化酵母Pvu传几代酵母DNAPvuPvu连接转化酵母传几代图11-56四膜虫与酵母TEL的拼接以及酵母细胞将其特有的TEL加到四膜虫的TEL上(参考Shampg,JandBlackburnetal:《Nature》1984,310:154-157)