遗传学实验报告.docx

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1、昆明理工大学医学院医学遗传学实验报告册姓名：班级：学号：遗传学教研室实验报告一一、实验原理：无精子因子（azoospermiafactor，AZF）是在1993年发现的已经被确认为精子发生所必须的。AZF基因位于Y染色体（Yq11）上，并在睾丸内特异性表达。探讨Y染色体上无精子因子（AZF）微缺失与男性不育的关系。应用多重PCR技术，检测AZF片段缺失。二、实验材料：1、病人全血标本样品。2、上下游引物一对。3、PCR反应体系（酶、buffer、DNTP等。）。4、琼脂糖、TAE溶液、EB、DN

2、Aloaldingbuffer。5、琼脂糖电泳仪（套），凝胶成像系统。6、PCR仪。三、实验方法：1、制备PCR反应体系。2、将引物和模板分别加入反应体系中。3、设置PCR反应程序、将反应体系放入PCR仪中。4、制备琼脂糖凝胶。5、将反应完毕的PCR体系取出适量，与loaldingbuffer混合加入到琼脂糖当中。6、设置电泳条件及时间，结束后用凝胶成像系统观察结果。四、实验结果：五、思考题：1、根据实验结果，检测自己的实验结果是阳性还是阴性？2、实验的检测结果说明了什么？实验报告二一、实验原理

3、：人类外周血细胞本来是终末分化细胞，一般没有分裂能力，但经PHA（植物血球凝集素）或ConA等药物刺激后，转变成可分裂的转化细胞。向培养物中加入适量的秋水仙素，使纺锤体微管解聚，这样细胞停留在中期，可以获得大量的分裂细胞。用低渗盐溶液（一般是0.075mol/L的KCl）处理，使其中的红细胞及分裂相细胞膜和一部分细胞质除去，最后以气干法制片，可获得较好的染色体标本。二、实验材料：（1）2ml注射器、培养瓶、离心管、吸管、量筒、载玻片。（2）超净工作台，恒温培养箱，天平，离心机、显微镜等。（3）试

4、剂：①培养基的配制：（RPMI1640培养基4ml+小牛血清1ml+双抗各100IU/ml+PHA0.2ml)以5%NaHCO3调pH至7.2～7.4,4℃备用。②肝素：称取0.2g溶于100ml双蒸水中，浓度为0.2%，灭菌。③秋水仙素：生理盐水配制成20μg/ml浓度，灭菌，分装，置－20℃。④低渗液：0.075mol/LKCl。⑤固定液：甲醇∶冰乙酸（3∶1），临时配制。⑥Giemsa工作液：1份原液和９份磷酸缓冲液，临时配制。⑦磷酸缓冲液：1/15mol/LNa2HPO4、1/15mol

5、/LKH2PO4等体积混合。⑧5%NaHCO3灭菌滤器抽滤备用。三、实验方法：1、外周血接种：取新鲜血液样本0.5-0.8ml，加入到配置好的1640培养基中。利用PHA刺激细胞增殖，培养72-96H。2、在收取细胞前加入秋水仙素（10ug/ml）10ul终止细胞分离，继续培养细胞2小时。3、将处理好的细胞标注清楚，放入离心机中，1600转离心7分钟。4、弃上清，加入已预热额kcl低渗溶液8ml，充分混匀，使细胞与低渗液充分接触，静置30分钟后1600转离心7分钟。5、弃上清，加入新配置的固定液

6、1.5—2ml，充分混匀，静置30分钟后1600转离心7分钟。6、弃上清，再次加入固定液8ml，充分混匀，静置30分钟后1600转离心7分钟。7、弃上清，再次加入固定液6ml，充分混匀，静置30分钟后1600转离心7分钟。8、弃上清、加入1-2ml固定液，制成悬液。9、取悬液，滴在载玻片上，用酒精灯短暂烧烤。10、将制好的标本放入烘箱中老化。四、实验结果：五、思考题：1、染色体提取过程中要注意哪些事项？2、染色制备过程中哪些步骤最重要？实验报告三一、实验原理：人们用物理、化学因素处理后，再用染料

7、对染色体进行分化染色，使每条染色体上出现明暗相间，或深浅不同带纹的技术称为显带技术（bandingtechnique）。染色带的数目、部位、宽窄和着色深浅均具有相对稳定性，所以每一条染色体都有固定的分带模式，即称带型。染色体带型是鉴别染色体的重要依据。一、实验材料：1、染色体标本（实验二中制备完毕）。2、Giemsa工作液：1份原液和９份磷酸缓冲液，临时配制。3、磷酸缓冲液：1/15mol/LNa2HPO4、1/15mol/LKH2PO4等体积混合。4、5%NaHCO3灭菌滤器抽滤备用。5、吉姆

8、萨染色液。7、胰酶消化液。三、实验方法：1、将制备好的染色体标本放入Na2HPO4+KH2PO4+胰酶消化液的混合液中2分钟。2、取出染色体标本，放入Na2HPO4+KH2PO4+吉姆萨的混合液体中染色。3、待染色体标本晾干以后，上镜观察。四、实验结果：五、思考题：1、制备出良好的G带染色体标本需要注意哪些事项？2、染色体显带有何意义？