红掌细菌性叶枯病病原菌的分离与鉴定.pdf

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1、第4卷第4期热带生物学报Vo1．4No．42013年12月JoURNALoFTROPICALBIoLOGYDec．2013文章编号：1674—7054(2013)04—0327—05红掌细菌性叶枯病病原菌的分离与鉴定梁丽雯，任希望，高志亮，符秀梅，林道哲，罗红丽，陈银华(I．海南大学海南省热带生物资源可持续利用重点实验室，海南海口570228；2．海南大学农学院，海南海口570228)摘要：采用组织分离法，从发病的红掌叶片上分离、纯化病原菌，对纯化的病原菌进行菌落形态、致病性、生化特性测定，并对细菌特异基因ABCt

2、ransporter进行分离及序列分析。结果表明，分离得到的病原菌为地毯草黄单胞菌属细菌，为红掌的致病菌。关键词：红掌；细菌性叶枯病；病原菌鉴定；地毯草黄单胞菌属(Xanthomonasaxonopodis)中图分类号：S682．14文献标志码：A红掌(Anthuriumandraeanum)是多年生常绿草本花卉，又名灯台花，隶属天南星科花烛属，是名贵的热带切花，原产哥伦比亚西南部热带雨林，现在非洲、欧洲和亚洲均有广泛栽培。随着红掌生产规模的不断扩大，由细菌引起的叶枯病在美国、荷兰、意大利、菲律宾等地相继发生，已逐

3、渐成为红掌生长发展的制约因素。1960年该病害在巴西红掌上发生，随后相继在夏威夷、佛罗里达和加利福利亚等地发现；2000年后该病害在我国大陆地区逐年发生，并在夏秋季节出现局部地区爆发的现象，对正在发展的红掌种植业造成了严重的影响。现有研究表明，红掌细菌性叶枯病致病菌有黄单胞菌(Xanthomonas)¨、假单胞菌属(Pseudomona)和欧文氏菌属(Erwinia)不同种或致病变种；我国郑平报道的病原菌为杓兰欧文氏菌(Erwiniacypripedii)]，许秀惠报道的病原菌为地毯草黄单胞菌花叶万年青致病变种(X

4、an—thomonasaxonopodispv．diefenbachiae)。由此可见，在我国引起红掌细菌性叶枯病的病原菌至少有几个种或致病变种。海南是我国红掌主产区之一，对其病害优势种群进行调查和分离，有利于采取针对性的防控措施。笔者采用组织分离法，从红掌病叶上分离纯化病原菌，对纯化后的病原菌进行形态观察、生理生化特性研究等，并结合分子生物学手段对病原菌进行鉴定，旨在了解海南红掌产业病害优势小种，并为开展红掌抗病育种提供资源。1材料与方法1．1材料参试的3个红掌主栽品种为‘大哥大’、‘骄阳’以及‘热情’，病叶取自

5、海南儋州中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所(简称“品资所”)苗圃。1．2方法1．2．1病原茵的分离与纯化采取组织分离法对病原菌进行分离。选取具有典型病斑的病叶，用剪刀剪取病斑与健康叶片交界的区域，大小约1am×1am，先用=75％的酒精进行表面消毒15—30s，接着用无菌水清洗2—3次，晾干后，置于灭菌研钵内，加入1mL的无菌水进行研磨。将研磨液收集后短暂离心，取上清稀释5000倍，涂于改良的PSA培养基上(胰化蛋白胨10g·L～、蔗糖10g-L～、谷氨酸1g·L～、收稿日期：2013—11～06基金项目：国

6、家自然基金(31060040，31260345)；海南省重大科技专项(ZDZX2013023-02)作者简介：梁丽雯(1987一)，女，广东阳江人，海南大学农学院2010级硕士研究生．通信作者：陈银华(1976一)，教授，安徽安庆人，主要从事植物逆境分子生物学研究．E—mml：yhchen@hainu．edu．cn第4期梁丽雯等：红掌细菌性叶枯病病原菌的分离与鉴定331参考文献：[1]刘琼光，梁建梅，李志伟，等．红掌细菌性叶枯病的病原鉴定[J]．华中农业大学学报，2007，26(2)：174—177．[2]HAYW

7、ARDAC．AbacterialnewdiseaseofAnthuriumandreanuminHawaii[J]．PlantDis．Rep．，1972，56：904—908．[3]杜平，邵小斌．我国红掌的研究进展[J]．江苏农业科学，2011，39(6)：325—327．[4]NORMANDJ，ALVAREZAM．ArapidmethodforpresumptiveidentificationofXanthomonascampestrispv．diefenbachiaeandotherxanthomonas[J]

8、．PlantDisease，1989，124：215—224．[5]卢梦玲，周晓云，曾伟达，等．红掌细菌性疫病病原菌的PCR特异性检测[J]．植物病理学报，2012，42(1)：1—9．[6]许秀惠，林俊义．台湾红掌细菌性叶枯病及其病菌对药剂之感受性[J]．植物保护学会会刊，1998，40(4)：409—417．[7]郭春雷，蒋桂芝，祝伟，等．热带植物花卉红