法舒地尔联合谷氨酸降低胶质瘤细胞存活率.pdf

《法舒地尔联合谷氨酸降低胶质瘤细胞存活率.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、ChinJNervMentDisVo1．40，No．6June2014·论著·法舒地尔联合谷氨酸降低胶质瘤细胞存活率☆陈舒罗铭”蔡望青何明亮陈美惠刘安民【摘要】目的观察Rho激酶抑制剂法舒地尔对胶质瘤细胞NMDAR一1表达和联合谷氨酸降低细胞存活率。方法使用法舒地尔干预原代人脑胶质瘤细胞48h后再加入谷氨酸共同培养细胞24h。相差显微镜观察法舒地尔对细胞形态变化的影响；噻唑蓝(M1Tr)比色法检测细胞的存活率；免疫荧光和蛋白质印迹检测谷氨酸受体的表达变化。结果经过法舒地尔干预48h后，免疫荧光(NMDAR一1阳性细胞百分比计数：空白对照组18．9％±3．7％，Fas1001~mo

2、l／L组79．4％±6．4％，P<0．05)和蛋白质印迹表明谷氨酸受体的表达明显升高(Fas50~moYL组相对密度：Blank组4．07+1．04倍，P<0．05，Fasl001xmol／L组为4．89+0．96倍，P0．05；Fas50~moYL组和Fas5Op~mol／L+谷氨酸组为0．98~0．16和0．66~0．15，P<0．05；Fas1001~mol／L组和Fas1001xmol／L+谷氨酸组为0．89~0．13和0．4

3、9~0．17，P

4、用于蛛网膜下腔出血、脑缺法舒地尔诱导人脑胶质瘤原代细胞表达NM—血等中枢神经系统疾病的治疗中1。近年来的研DAR一1的情况，并联合谷氨酸探讨抗胶质瘤的可究发现—1，法舒地尔可明显诱导胶质瘤细胞株的细能作用。胞凋亡、抑制胶质瘤细胞的生长。N一甲基一D一天冬1材料和方法氨酸受体(N—methyl—D—aspartatereceptor，NMDAR)1．1实验材料人脑胶质母细胞瘤标本来自中山是细胞谷氨酸受体的一种亚型，能引起钙离子通大学孙逸仙纪念医院神经外科，术前经患者知情道开放，钙离子内流使得细胞内钙离子超载，造成同意，术后病理诊断为胶质母细胞瘤(WHO1V)。细胞凋亡，这可能作为胶

5、质瘤治疗的一个新的靶DMEM培养基，胎牛血清(Gibco公司)；二甲基亚点1。但是人脑胶质瘤细胞缺乏谷氨酸受体[7-9]，因砜(DMSO)，Hochest33258，谷氨酸(Glu)和噻唑此如何增强胶质瘤细胞中谷氨酸受体的表达使之蓝(MTY)(美国Sigma公司，谷氨酸纯度>98％)；法舒地尔(大连美伦，纯度>98％)；兔多克隆抗NM—doi：lO．3936／j．issn．1002—0152．2014．06．010DAR1抗体(武汉博士德)；辣根过氧化物酶标记☆广东省科技社会发展项目(编号：2O12Bo318o0356)资助山羊抗兔IgG二抗(ThermoScientific公司

6、)；Alexa中山大学孙逸仙纪念医院神经外科(广州510120)555标记山羊抗兔IgG二抗，青霉素一链霉素，RIPA肿瘤科裂解液，TritonX一100(碧云天)；PVDF膜(Millipore中山大学药学院药理学与毒理学实验室。通信作者(E—mail：drliuam@aliyun．tom)公司)；激光共聚焦显微镜，CK2型倒置相差显微史国神经精神疾病杂志2014年第4O卷第6期369镜(Olympus，日本)；酶标仪(美国Bio—Rad公司)。增强化学发光(ECL)法在显影仪下显影。Western1．2人脑胶质母细胞瘤标本进行细胞培养取下Blot条带应用QuantityOne

7、软件进行灰度分析。标本后1h内浸泡在含1％青霉素一链霉素的PBS1．6免疫荧光检测细胞连接处NMDAR一1的表达中，小心去除组织上的血管、脑膜等非肿瘤组织。法舒地尔培养细胞48h后，吸去培养液，用PBS洗将组织剪成大小约为lcm的小块，0．25％胰酶消3次。用4％多聚甲醛室温固定细胞15min，PBS洗化10—15min。吸取上清，向上清液中加入含10％净多聚甲醛后加入0．3％TfitonX一100透膜15min。胎牛血清和1％青霉素一链霉素的DMED培养液，洗净TritonX一