纤毛虫施氏腹柱虫细胞纤毛器微管的激光共聚焦显微观察.pdf

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1、第32卷第2期电子显微学报VoL32．NO．22013年4月JournalofChineseElectronMicroscopySociety2013．04文章编号：1000—6281(2013)02．0156—07纤毛虫施氏腹柱虫细胞纤毛器微管的激光共聚焦显微观察翟羽佳，范鑫鹏，杨林颖，倪兵，顾福康(华东师范大学生命科学学院，上海200062)摘要：应用荧光紫杉醇荧光标记结合激光共聚焦显微术显示，土壤纤毛虫施氏腹柱虫(Gastrostylasteinii)细胞纤毛器微管胞器中，口围带和波动膜后端汇合处含

2、口底托架及口后微管束；额腹横棘毛基部舍前纵微管束、后纵微管束和横微管束；左、右缘棘毛基部含前纵微管束、后纵微管束、横微管束和基部微管芽。与目前了解的纤毛虫同类微管结构相比较，施氏腹柱虫显示出其适应于土壤环境而与水生纤毛虫有所区别的一些基本特征，其棘毛基部微管的组成及定位具有该种土壤纤毛虫细胞的特异性。形态发生中，老口围带全部保留，老的或先存的微管结构对新结构的发生和形成具有定位和物质贡献的作用，且老结构在新结构分化和成熟期间也经历着行使相应的生理功能及逐渐退化的过程。关键词：土壤纤毛虫；施氏腹柱虫；荧光紫

3、杉醇荧光标记；激光共聚焦显微术；纤毛器基部微管中图分类号：Q952；Q954；Q336；TG115．21文献标识码：Adoi：10．3969／j．1000—6281．2013．02．Ol1土壤原生动物是土壤生物群落中较小的一个类1材料与方法群。由于土壤环境的特殊性，土壤原生动物一般都为小型生物，大型的纤毛虫十分少见。在原生动1．1实验材料物的采集中，作者获得了一种大型的腹毛类土壤纤土壤样品于2012年1月采自山东省菏泽市成毛虫施氏腹柱虫(Gastrostylasteinii)，光镜下可见武县的小麦田地，施

4、氏腹柱虫经“非淹没培养皿”其身体柔软，易形成包囊及脱包囊，这与纤毛虫土法获得，分离后，应用麦粒发酵法获得的细菌作壤栖息种类的特点相符。土壤纤毛虫与其他土壤生为饵料，在室温下进行纯系培养，培养至较高密度后物一样在长期的适应和进化过程中，已逐步形成与取生长状态良好的细胞作为实验材料。土壤生活相适应的形态结构特征。因此，了解纤1．2标本制备毛虫在土壤环境中的生活及运动，其运动纤毛器的采用稍加调整后的荧光紫杉醇标记法’制备分化特征及与其他常见水生纤毛虫的不同之处，其荧光标本，主要步骤为：①在薄的载玻片上滴50L纤

5、毛器微管骨架的特征，对于进一步揭示土壤纤毛浓度为0．5％的皂苷，将微吸管收集的纤毛虫滴入虫是如何适应土壤生活、细胞的结构与功能及其生皂苷中渗透20S，用PHEM清洗1次；②4％多聚甲物的多样性等有着重要意义。近年来，本实验室采醛中固定1min，PHEM清洗1次；③0．O1％Triton用直接荧光标记法及荧光显微技术，研究土壤纤毛X一100处理20S，PHEM清洗1次；④1~mol／L虫如草丛土毛虫的皮层纤毛器微管及其附属胞器的FLUTAX一2(Sigma)染色8min，0．01mol／L的PBS结构，取得

6、了重要进展。本文应用激光共聚焦漂洗6次。显微术显示了腹毛目纤毛虫施氏腹柱虫皮层微管类1．3激光共聚焦显微术细胞骨架及其附属微管的三维结构，取得了一些新应用激光共聚焦显微镜(LEICATCSSP5)，选的结果。用氩离子激光器，调节激光输出功率，光电倍增等至最佳状态；观察、聚焦标本，设置扫描方式及各项扫描参数，所选用的激发波长为488nm，发射波长为收稿日期：2012—12—17；修订日期：2013—02—27基金项目：国家自然科学基金资助项目(No．31172042)．作者简介：翟羽佳(1988一)，女(汉

7、族)，安徽阜阳人，硕士E-mail：yujiazhai1988@126．tom通讯作者：倪兵(1966一)，男(汉族)，上海人，副教授．E—mail：bni@bio．ecnH．edu．cn第2期翟羽佳等：纤毛虫施氏腹柱虫细胞纤毛器微管的激光共聚焦显微观察157490～530nm，进行共聚焦单个断层扫描图像的采微管束发达程度不一，前几根腹棘毛基部的后纵微集，保存图像并进行三维重建。管束较发达；横微管束由棘毛基部左后端伸出2m的短距离；周围微管束不发达(图版I：图6)；后22结果根腹棘毛基部发出的前纵微管束和

8、横棘毛基部发出2．1非分裂期细胞纤毛器结构的前纵微管束互相交织后向前方伸展并汇聚形成两在细胞腹面(图版I：图1)，口围带发达并呈个三角形微管层(图版I：图7)。横棘毛基部附属“?”型，位于细胞左侧可延伸到细胞中部1／2处，其微管中，前纵微管束发达，其粗壮的微管束由棘毛基领部和翻领部由39～48片小膜组成。波动膜含口部向左前方伸展l8～25I．Lm；后纵微管束较细、短，内膜和口侧膜各1片。额腹横棘毛的数目和分布具周围微管束发达(