结球甘蓝BoLH01和BoLH02基因的克隆与表达.pdf

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1、作物学报ACTAAGRONOMICASINICA2014，40(8)：1371—1379http：／／zwxb．chinacrops．org／ISSN0496—3490；CODENTSHPA9E—mail：xbzw@chinajourna1．net．caDoI：1O．3724／SP．J．1006．2014．01371结球甘蓝BoLHO1和BoLH02基因的克隆与表达张林成高启国，蒲全明任雪松刘豫东朱利泉2王小佳西南大学园艺园林学院／南方山地园艺学教育部重点实验室，重庆400716；。西南大学农学与生物科技学院，重庆400716摘要：bHLH类转录因子在

2、植物叶片形态建成和发育过程中发挥重要的生理功能。本文通过结球甘蓝转录组数据分析，筛选出莲座期和结球期的茎尖间与叶片问均显著差异表达的2个bHLH类转录因子，命名为BoLHO1和BoLH02基因，获得了2个基因的编码序列，其中BoLHO1基因CDS全长为966bp、编码321个氨基酸；BoLH02基因CDS全长870bp、编码289个氨基酸；序列分析表明BoLH01和BoLH02分别与拟南芥AtbHLH18和AtbHLH19氨基酸同源相似性最高，达81％和74％，均具典型bHLH结构域特点和完全保守的13E一16R和9H一13E．17R以及Leu23对应

3、的关键氨基酸位点；分子进化上BoLH01、BoLH02与AtTCP2／3／4／10／24亲缘关系较近，与AtTCP9／11／14／15较远；转录组和荧光定量PCR分析表明BoLHO1和BoLH02在平展的莲座叶中表达量较低，在卷曲的球叶中高量表达；序列分析BoHB7、BoHB12和BolLL6的ATG上游均包含能被bHLH功能域识别的E．box序列，对BoHB7、BoHB12和BolLL6荧光定量PCR分析表明，三者与BoLHO1和BoLH02在不同时期叶片中表达量的变化趋势完全一致；说明BoLH01和BoLH02可能通过正向调控BoHB7、BoHB1

4、2、BolLL6基因的表达来参与甘蓝叶片卷曲的调控。关键词：甘蓝；叶片卷曲；基因克隆；表达分析CloningandExpressionAnalysisofBoLHOlandBoLH02GenesinCabbageZHANGLin—Cheng，GAOQi—Guo，，PUQuan—Ming，RENXue—Song，LIUYu—Dong，ZHULi．Quan。，andWANGXiao—JiaCollegeofHorticultureandLandscapeArchitecture，SouthwestUniversity／KeyLaboratoryofHort

5、icultureScienceforSouthernMountainousRegions，MinistryofEducation，Chongqing400716，China；CollegeofAgronomyandBiotechnology，SouthwestUniversity，Chongqing400716，ChinaAbstract：Basichelix-loop-helixfbHLH)transcriptionfactorsplayallimportantroleintheleafmorphogenesisandleafdevelop—ment

6、．Inthisstudy,throughtranscriptomeanalyses，twobHLHtranscriptionfactorgenes，diferentiallyexpressedinleavesandshoottipsbetweencabbageroseestageandheadingstagewerescreened、namedBoLHo1andBoLHo2genes．ThecAse．quencesof口0L日D1andBoL日D2wereclonedfromcabbage(Brassciaoleraceavar．capitata)．T

7、heCDSofDL啪1was966bp．whichencoded32、aminoacids．andtheCDSQtBoLHo2was870bp．whichencoded289aminoacids．SequenceanalysisshowedthatthesimilarityofBoLH01andBoLH02withAtbHLH18andAtbHLH19was81％and74％respectively．Theycon．tainedthetypicalbHLHdomains．conservative13E．16R．9E．13R一17HandLeu23cor

8、respondingkeYaminoacidsites．Phyloge．netictreean