2、微生物检验技术及硬件选择

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1、微生物检验技术及硬件选择中国工业微生物菌种保藏管理中心CICC姚粟内容微生物纯培养分离技术微生物检验技术及硬件设备微生物纯培养分离技术纯培养物是指来源于同一单细胞的细胞群体。获得纯培养物对微生物学研究至关重要。微生物纯培养分离技术涂布平板法平板划线法平板倾注法稀释摇管法液体培养基分离法单细胞（孢子）分离法选择培养基分离法涂布平板法1、少量样品加到平板中央（1mL）；2、玻璃三角涂棒浸入酒精；3、沾有酒精的涂棒在火焰上灼烧后使其冷却；4、无菌涂棒将样品均匀涂布琼脂培养基表面，适当条件下培养。平板划线法斜线法

2、曲线法方格法放射法四格法平板划线法斜线法：用接种环以无菌操作挑取菌悬液一环，先在平板培养基的一边作第一次平行划线3-4条，再转动培养皿70°角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和第四次平行划线。曲线法：将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连续划线。平板划线法血琼脂平板上的金黄色葡萄球菌（大的金黄色菌落）在划线过程中，细胞逐渐分散，培养后可形成单个菌落。成功获得纯培养物依赖于样品中混合在一起的细胞是否有效的被相互分开。平板倾注

3、法对起始样品进行连续10倍稀释，将高稀释倍数的样品与冷却至适当温度的溶化琼脂培养基倒入无菌平皿后混合均匀，培养后获得单菌落。培养基表面菌落为圆形，而培养基内部菌落呈豆状或透镜状。稀释摇管法适合厌氧菌的纯培养分离无菌琼脂培养基试管加热使琼脂熔化后冷却并保持在50℃左右梯度稀释后的待分离菌株加入试管中摇匀、冷凝在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物培养后，菌落形成在琼脂柱的中间液体培养基分离不能在固体培养基上生长的微生物仍需要用液体培养基分离来获得纯培养。稀释法是液体培养基分离纯化常用的方法。在同

4、一个稀释度的许多平行试管中，大多数（一般应超过95%）表现为不生长。单细胞（孢子）分离单细胞（或单孢子）分离法是采取显微分离法从混杂群体中直接分离单个细胞或单个个体进行培养以获得纯培养。较大的微生物，可采用毛细管提取单个个体。个体相对较小的微生物，需采用显微操作仪，在显微镜下用毛细管或显微针、钩、环等挑取单个微生物细胞或孢子以获得纯培养。单细胞分离法对操作技术有比较高的要求。选择培养基分离选择培养基特性促生长能力抑制能力指示（鉴别）能力选择培养基分离传统选择性培养基血平板：适于各类细菌的生长，一般细菌检验

5、标本的分离，都应接种此平板。营养肉汤：用于标本及各类细菌的增菌巧克力血平板：其中含有V和X因子，适于接种疑有嗜血杆菌、奈瑟菌等的标本。中国蓝平板或伊红美蓝平板：可抑制G+细菌，有选择地促进G-菌生长，是较好的弱选择性培养基。麦康凯平板：具中等强度选择性，抑菌力略强，有较少革兰阴性菌不生长。SS琼脂：有较强的抑菌力，用于志贺菌和沙门菌的分离。碱性琼脂：用于从粪便中分离霍乱弧菌及其它弧菌。选择培养基分离新型显色培养基利用微生物自身代谢产生的酶与相应显色底物反应显色的原理来检测微生物的培养基。OrganismE

6、nzymeSubstrateColorColiformsβ-galactosidaseX-GALBlueEscherichiacoliβ-galactosidaseβ-GlucuronidaseMUGfluorescenceEscherichiacoliO157β-galactosidaseX-GALBlue微生物菌种检验技术采用多相鉴定技术确定菌株的分类地位采用菌株分型技术进行污染菌溯源分析微生物菌种检验技术分类等级界（Domain）门（Phylum）纲（Class）目（Order）科（Family）属

7、（Genus）种（Species）三界系统细菌真核生物古菌“种”：微生物基本分类单元微生物菌种检验技术“种”的定义：一个种（基因型种）是有相似G+C组成并通过DNA杂交试验判断有70%或更大相似性的菌株的集合。种的鉴定：确定新的分离物属于已知分类单元“种”的过程。微生物菌种检验技术微生物菌种检验微生物菌种鉴定目标菌检验：它是不是某一种菌?菌种鉴定:它是什么菌？（未知菌）控制菌：大肠埃希菌（Escherichiacoli）大肠菌群（Coliform）沙门菌（Salmonella）铜绿假单胞菌（Pseudom

8、onasaeruginosa）金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）梭菌（Clostridium）白假丝酵母（Candidaalbicans）致病菌：大肠埃希菌（Escherichiacoli）大肠菌群（Coliform）沙门菌（Salmonella）金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）单核细胞增生李斯特氏菌（Listeriamonocytogenes）阪岐肠杆菌（Enterobact