细胞迁移培养实验服务.doc

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1、细胞迁移培养实验服务一、细胞迁移服务介绍细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动C细胞迁移为细胞头部伪足的延伸、新的黏附建立、细胞体尾部收缩在时空上的交替过程。细胞迁移是正常细胞的基本功能之一，是机体正常生长发育的生理过程，也是活细胞普遍存在的一种运动形式。胚胎发育、血管生成、伤口愈合、免疫反应、炎症反应、动脉粥样硬化、癌症转移等过程中都涉及细胞迁移。检测细胞迁移能力的实验包括划痕实验和Transwel1实验。【晶莱生物】二、实验原理细胞划痕实验是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，用微量枪头或

2、其它硬物在细胞生长的中央区域划线，去除中央部分的细胞，然后继续培养细胞至实验设定的时间是一•种简单易行的检测细胞运动的方法，实验成本低，可以用来检测贴壁生长肿瘤细胞的侵袭转移能力cTranswell的基本原理是将transwell小室放入培养板中，小室内称为上室，培养板内称为下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，上室内添加上层培养液，下室内添加下层培养液。将细胞种在上室内，由于膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。实验材料（1）Transwellchamber:24-well,8.0

3、-nmporemembranes（Corning）（2）细胞培养相关试剂：无血清培养基，10%血清培养基，PBS,0.02%EDTA（3）固定液：甲醇（4）染色液：Giemsa染液（5）封片剂：中性树胶（6）其他：小镶子，棉棒，载玻片，盖玻片三、实验流程（1）划痕实验1.用marker笔在6孔板背后均匀得划横线；2.在孔中加入细胞；3.第二天用枪头垂至于背后的横线划痕；4.用PBS洗去处划下的细胞，培养不同时间，取样，拍照；5.数据处理：每个时间点细胞整体迁移距离二每个时间点距离长度-0时距离；6.结果统计分析。（2）Transwell实验1.采用未铺

4、Matrigel胶的Transwel1小室用于实验;2.制备细胞悬液；3.接种细胞；4.检测穿过的细胞数；5.结果统计分析。注意事项（1）根据待测细胞体积大小选择合适孔径的chambero常用的为8.0-um孔径（如AGS细胞），如果细胞体积较大可以考虑用10-um孔径；（2）根据待测细胞的迁移能力强弱调整细胞数和迁移时间。常规24-wellchamber接种细胞数约为2p5X104/wc11,迁移时间12^36小时；（3）由于Corning公司的24~Transwell内含12个独立的chamber,为了避免操作污染，每次实验可预先另准备一块24孔普

5、通培养板（Corning）；（4）如果细胞迁移能力较弱，下室液体可用3T3细胞无血清培养24小时获得的上清加50Pg/mlFN（Fibronectin）,具体可查阅相关文献;（5）细胞悬液加入膜中央，尽量保证液而水平；（6）固定染色擦洗时动作小心，避免擦去膜底面的细胞。但一定要充分擦净膜表面上未迁移的细胞，以免影响读数。尤其是膜周边上可用细牙签或小锻子缠上湿棉花擦洗，但要小心避免将膜戳破；（7）Chamber和膜上都无法标记，操作时应小心避免混淆实验组和对照组；（8）充分晾干，避免残留水分导致镜下聚焦不一致。三、细胞侵袭实验（cellinvasiona

6、ssay）1.实验材料（1）Matrigel（BD5mg/ml）,-20°C保存（2）其余材料同迁移实验2.操作步骤（1）Matrigel在4°C过夜融化；（2）用4°C预冷的无血清培养基稀释Matrigel至终浓度冰上操作；（3）在chamber±室底部中央垂直加入100P1稀释后的Matrigel,37C温育4—5小时使其干成胶状；（4）后续步骤同迁移实验（1-8）°3.注意事项（1）Matrigel在过高或过低的温度均易凝固，因此操作所需枪头和离心管应提前在4C预冷；（2）铺胶时保证液面水平，胶的厚度均匀一致，切勿产生气泡；（3）其他注意事项同迁

7、移试验。