鹅SCD1基因真核表达载体构建及在肝细胞中的表达.pdf

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1、上海交通大学学报(农业科学版)Vo1．32No．2第32卷第2期2014年4月(AGRICULTURALSCIENCE)Apr．2014JOURNAL()FSHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITY文誊编号：1671—9964(2014)020005—05DOI：10．3969／J．ISSN．1671—9964．2014．02．002鹅SCD1基因真核表达载体构建及在肝细胞中的表达张宜辉，张蕊，张军，王洪荣，龚道清(扬州大学动物科学与技术学院，江苏扬州225009)摘要：构建硬酯酰辅酶A去饱和酶1(Stearoyl—CoADesaturasel

2、，SCD1)真核表达质粒pcDNA3．1(+)／SCD1，转染鹅原代肝细胞验证其对细胞中脂肪代谢的影响。根据鹅SCD1基因设计带有酶切位点引物，RT-PCR扩增SCD1基因，克隆至pMD-19T载体，亚克隆至pcDNA3．1载体，构建重组真核表达载体pCDNA3．1(+)／SCD1。酶切及序列测定测序正确后转染鹅原代培养肝细胞，荧光定量PCR检测SCD1基因的表达，并用油红O染色检测细胞中脂滴情况。结果：成功构建SCD1基因真核表达载体，转染鹅原代培养肝细胞后SCD1基因获得了表达，与脂肪代谢相关基因SREBP表达上调，同时检测到细胞中脂滴明显增多。结论

3、：构建了重组质粒pCDNA3．1(+)／SCD1，并在鹅原代培养细胞中获得表达，为进一步研究SCD1基因在鹅肝脏脂肪代谢中的作用奠定基础。关键词：鹅；SCD1基因原代肝细胞；真核表达中图分类号：$858．33文献标识码：AConstructionandExpressionofGooseSOD1GeneinPrimaryHepatocyteZHANG一hui，ZHANGRui，ZHANGJun，WANGHong—rong，GONGDao—qing(CollegeofAnimalScienceandTechnology，YangzhouUniversity，

4、Yangzhou225009，China)Abstract：Inordertoinvestigatetheinfluenceofgoosestearoyl—CoAdesaturase1(SCD1)Ollfatmetabolism。aeukaryoticexpressionvectorpcDNA3．1(+)／SCD1wasconstructedandtherecombinantproteinwasexpressedingooseprimaryhepatocyte．SCD1ORFwasamplifiedbyRT-PCRfromgooseliversample

5、s．TheeukaryoticexpressionvectorpcDNA3．1(+)／SCD1wasconstructedbyintroducingSCD1DNAfragmentintothesitesofEcoRIandXho工ofpcDNA3．1(+)．TheplasmidpcDNA3．1(~)／SCD1wastransfectedintogooseprimaryhepatocytewithlipofectinmethod．TheexpressionofSCD1wasdetectedandlipidmetabolismgenesSREBPwasupr

6、egulatedbyreal—timePCR．Restrictiveendonucleaseassayandsequenceanalysisverifiedthesuccessfu1constructionoftherecombinantvectorpcDNA3．1(+)／SCD1．ThetranscriptionOfSCD1mRNAwasdetectedintransfectedgooseprimaryhepatocyteandthelipiddropletwasincreased．Thisstudyprovidesafoundationforfurt

7、herstudyonfunctionofSCDJgeneongoosefatmetabolism．Keywords：goose；SCD1gene；primaryhepatocyte；eukaryoticexpression收稿日期：2013—11—05基金项目：江苏省研究生科研创新计划项目(CXZZ12—0912)；国家自然科学基金项目(31072021)作者简介：张宜辉(1985一)，男，博士生，研究方向：分子营养，E—mail：first222686@126．corn；龚道清(1966一)为本文通讯作者，教授，博导，研究方向：家禽遗传育种，E-mai

8、l：yzgong@163．tom上海交通大学学报(农业科学版)第32卷硬酯酰辅酶