链霉菌次级代谢产物 CF01对小鼠肝癌 H22的抑制作用及其机制分析.pdf

《链霉菌次级代谢产物 CF01对小鼠肝癌 H22的抑制作用及其机制分析.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、l86世界最新医学信息文摘2013年第13卷第28期·实验研究·链霉菌次级代谢产物CFO1对小鼠肝癌H22的抑制作用及其机制分析柯春林，黄维～，叶敏，张敏，吴群丹(1．福建医科大学附属第一医院肿瘤放疗科，福建福州350005；2．福建医科大学药学院，福建福州3500043．福建省微生物研究所，福建福州350007)摘要：本文通过CFO1对体内外小鼠肝癌细胞H22增殖的抑制作用，来探索CFO1的抗肿瘤作用及其初步机制研究，进而得出结论：CFO1对小鼠H22肝癌有显著的抑制瘤块生长的作用，对癌症的预防和治疗研究具有一定的价值。关键词：CFO1；小鼠肝癌细胞；多靶点抗肿瘤药

2、物中图分类号：11446文献标识码：BDOI：10．3969／j．issn．1671．3141．2013．28．1580引言行孔。作用48h后，加入MTT(5mg／m1)201每孑L，混匀微生物是具有潜在治疗效用的新结构化合物的无穷源后继续培养4小时，除去上清液，以每孔150l的量加入泉，从微生物次级代谢产物中寻找新的有生理活性的物质，DMSO并混匀，各组均于570nm处测定各孔的OD值，按是新药开发的重要来源⋯。到目前为止，链霉菌是微生物中下列公式计算细胞生长抑制率及IC50．产生抗生素最多的菌种。至今各国学者仍在不断拓展链霉抑制率=(1一药物处理孔的平均OD值／细

3、胞对照孔的菌的来源，并且研究设计新的分离、培养、鉴定和分类方法，平均OD值)x100％以指导新的天然生物活性物质的寻找。1．2．2流武细胞仪检测CF01对H22细胞的诱导凋亡作用肝细胞癌(HCC)位居世界恶性肿瘤发病率的第五位，是利用CantonII流式细胞仪和AnnexinV—FITC和PI全球第三位的癌症死亡原因；HCC是我国最常见的恶性肿瘤双染试剂盒检测H22细胞的凋亡。不同浓度CFO1处理之一，具有恶性程度高，易复发、转移、预后差的特点。即H222细胞24小时后，用不含EDTA的0．25％的胰酶消化使施行肝癌根治性切除的肝癌患者，术后3年生存率只有后，于室温2

4、000rpm离心5～10分钟，收集细胞；用预冷40～50％，其原因与肝细胞癌易侵袭转移的生物学特性有关1xPBS(4℃)重悬细胞一次，2000rpm离心5～10分钟，】洗涤细胞。加入300L的1xBindingBufer悬浮细胞。加。至今肿瘤转移及其调控的确切机制仍不清楚，而且无法在临床上采取有效的治疗措施，因此，揭示恶性肿瘤转移及入5L的AnnexinV—FITC混匀后，避光，室温孵育15分钟。其调控的确切分子机制已成为临床提高肿瘤治疗效果的迫上机前5分钟再加入5L的PI染色。切需要，这一领域也成为分子肿瘤学、分子生物学等基础理1．2．3免疫印迹法检测蛋白含量的变化

5、论学科研究的热点。用不同浓度的CF01处理细胞后，提取H22细胞的总CF01是从链霉菌中提取出来的一个化合物。在前期的蛋白，用BCA法进行蛋白定量，作出标准曲线后调节样品体外细胞筛选中f3】，CFOI具有抗肿瘤作用，能抑制多种肿浓度，用4xSDS上样缓冲液稀释，于98oC下变性5rain，瘤细胞的体外生长，而且急性毒性实验表明其具有安全、然后按20—50g蛋白上样，用10％或12％的SDS—毒副作用小的特点。本研究通过观察CFO1对小鼠H22细胞PAGE凝胶进行电泳后，将蛋白转移至PVDF膜上，用含的抑制作用，对接种H22移植瘤的小鼠进行灌胃给药，用5％脱脂奶粉的封闭

6、液封闭半小时，加入l：1000稀释后的WesternBlot方法进行免疫印记，从体内和体外研究CFO1AKT及P-AKT、roTORRaf、MEKp-MEK、p-ERKI／2友的抗肿瘤作用机制。ERK1／2、Hsp90、B—aetin单抗于4℃过夜，TBST洗涤三次后，1材料与方法加入1：5000稀释后的二抗于室温下孵育1h，再用化学发光法进行显影。1．1材料1．2．4动物实验1．1．1药品与试剂按常规方法接种肿瘤细胞：取腹腔传代68d的生长四甲基偶氮唑盐(MTT)；RPMI一1640培养基；环磷酰良好的乳白色腹水，用生理盐水稀释至1x107个／ml。将胺(CTX)；

7、胎牛血清；二甲基亚砜(DMSO)(分析纯)。1．1．2细胞株及培养条件小白鼠随机分组后，以0．2ml接种于小鼠右腋皮下，实验分小鼠H22腹水型肝癌细胞株均购自上海细胞微生物研为4组，分别为空白组、低剂量给药组(50mg／kg)、中剂量给药组(100mg／kg)、高剂量给药组(200mg／kg)，每组究所，由福建医科大学药学院临床药理所保存，常规传代培养。10只。于接种24h后开始灌胃给药，每天一次，连续14d，1．1_3动物于第15d称体重，颈椎脱臼处死动物。剥离肿瘤组织，用普通级昆明种小鼠，体重18—22g，雌雄各半。滤纸吸干后称重。计算肿瘤抑瘤率