小菜蛾普通气味结合蛋白2基因的原核表达与多克隆抗体制备.pdf

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1、环境昆虫学报JournalofEnvironmentalEntomology，June2010，32(2)：194—198ISSN1674-0858doi：10．3969／i．issn．1674—0858．2010．02．008小菜蛾普通气味结合蛋白2基因的原核表达与多克隆抗体制备徐红星，陈东旭，张雅林，王敦(西北农林科技大学植保资源与利用教育部重点实验室，陕西杨凌712100)摘要：本实验提取羽化3d的小菜蛾Plutellaxylostella成虫触角总RNA，反转录合成cDNA，以此为模板PCR扩增出小菜蛾普通气味结合蛋白2基因，大小为492bp，Blast结果显示与多种昆虫的GO

2、BP2具有较高的同源性。将该基因克隆到表达载体pMAL—c4E中，转化宿主菌TB1(DE3)，获得单克隆重组质粒pMAL—c4E—GOBP2。IPTG成功诱导pMAL—c4E—GOBP2表达出约60kDa的融合蛋白。优化诱导条件为3mmoL／L终浓度IPTG、6h，可获得大量可溶性蛋白。表达的融合蛋白通过亲和色谱法纯化、免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。ELISA分析表明制备的抗体效价达1：1．28×10。关键词：小菜蛾；GOBP2；原核表达；多克隆抗体中图分类号：Q966文献标识码：A文章编号：1674-0858(2010)01-0194-05Cloning，prokaryoticex

3、pressionandpolyclonalantibodypreparationofPlutellaxylostellageneralodorantbindingprotein2(GOBP2)geneXUHong—Xing，CHENDong-Xu，ZHANGYa·Lin，WANGDun(MinistryEducationKeyLaboratoryofPlantProtectionResources&PestManagement，NorthwestA&FUniversity，Yangling712100，ShaanxiProvine，China)Abstract：A492bpopenre

4、adingflameofthegeneralodorantbindingprotein2(GOBP2)genewasam-plifiedbyPCRwithcDNAofnewlyemergedPlutellaxylostellaantennaeastemplateandsequenced．TheresultofBlastshowedthattheclonedgenehashighnucleotidesequenceshomologywithotherinsect．ThegenewasclonedintopMAL—c4Eprokaryoticexpressivevectors，andthe

5、constructedrecombinantplas·midspMAL-c4E-GOBP2weretransformedintothehostbacteriaE．coliTB1(DE3)．111eexpressiveproductinducedbyIGwasidentifiedbySDS—PAGEandWesternblotanalysis．TheresultsshowedthattherecombinantvectorpMAL．c4E．GOBP2produceda60kDarecombinantprotein．whichwaspurifiedbyafinitychromatograp

6、hyandtheninjectedintoNewZealandrabbittoinduceimmuneserum(poly-clonalantibody)．ELISAanalysisshowedthetiterforthepolyclonalantibodywas1：1．28×10’．Keywords：Plutellaxylostella；GOBP2；prokaryoticexpression；polyclonalantibody小菜蛾Plutellaxylostella是世界性的十字花科目害虫，且其抗药性在近几十年内显著增强。研究蔬菜和油料作物的重要害虫之一，每年因小菜蛾为表明，小菜

7、蛾的抗药性与过分单一的使用农药进行害造成程度不同的损失(TalekarandShehon，防治关系密切(Sarauereta1．，2003)。高毒高残留1993)。小菜蛾在我国各地均有发生，南方危害尤农药的使用不仅增强了昆虫的抗药性，也危害了人为严重。小菜蛾是最早发现的具有抗药性的鳞翅们的身体健康，因此有必要发展一种安全、高效的基金项目：国家自然科学基金(30872033)作者简介：徐红星，男，1983年生，硕士研究生，主要从事昆虫气味结合蛋白