小白菊内酯对人肝癌细胞HepG-2细胞Caspase-3和NF-κB蛋白表达的影响.pdf

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1、·46·黑龙江医药科学2015年8月第38卷第4期小白菊内酯对人肝癌细胞HepG一2细胞Caspase一3和NF—s：B蛋白表达的影响①韩琨景，杨万山，孙抒，辛悦(1．延边大学医学院病理学与法医学教研室，吉林延吉133002；2．白城市镇赉县人民医院病理科，吉林白城137300)摘要：目的：研究小白菊内酯对人肝癌细胞HepG一2增殖抑制和诱导凋亡作用的机制。为小白菊内酯在临床上早日应用于肝癌患者提供理论及实验依据。方法：用体外培养的方法培养人肝癌HepG一2细胞；用四唑盐(M'rr)比色法检测小白菊内酯对人肝癌HepG一2细胞的抗增殖及细胞毒作用；用倒置显微镜、HE染色光学显微镜；用

2、免疫组织化学染色法检测小白菊内酯作用人肝癌HepG一2前后Caspase一3、NF—KB蛋白阳性表达变化的情况。通过以上实验研究小白菊内酯在体外对人肝癌HepG一2在细胞增殖、细胞凋亡等方面的影响及其作用机制。结果：(1)MTr法结果显示：小白菊内酯对人肝癌HepG一2细胞的作用影响具有浓度和时间依赖性；(2)细胞形态学观察：倒置显微镜观察到对照组细胞贴壁生长，伸展性良好，细胞呈梭形和多角形，细胞-e-_N连接紧密。小白菊内酯作用人肝癌HepG一224h以后，增殖速度减慢，细胞贴壁能力下降，细胞之间连接疏松。药物作用48h以后，增殖速度大大减慢，大部分细胞变圆漂浮在培养瓶中。药物作用

3、72h以后，几乎无活细胞，并且可见死细胞碎片；HE染色光学显微镜下观察：对照组细胞呈梭形和多角形，细胞之间连接紧密，细胞胞浆丰富，细胞核完整；药物作用24h以后，细胞伸展减弱，有一部分细胞呈现圆形，细胞之间连接疏松，核浓缩，染色质出现边聚；药物作用48h后视野中可见凋亡细胞和死亡细胞，细胞浆浓缩、染色质浓缩成新月形和“出泡”现象的变化；(3)免疫组化结果显示：实验组Caspase一3表达增加，NF—KB表达降低，与对照组相比具有显著性差异(P<0．05)。结论：小白菊内酯对人肝癌HepG一2细胞有明显的抑制增殖作用，呈现出浓度和时间的依赖性；小白菊内酯对人肝癌HepG一2细胞株有诱导

4、凋亡作用，其诱导人肝癌HepG一2细胞凋亡机制可能与NF—kB、Caspase一3等信号转导有关。关键词：小白菊内酯；人肝癌HepG一2细胞；增殖抑制；凋亡中图分类号：R735．7文献标识码：A文章编号：1008—0104(2015)04—0046—04小白菊内酯是小白菊的主要有效成分，它属于公司，RPMI一1640培养液：碧云天试剂公司；胎牛血种半萜稀内酯化合物，也是西方的传统药物。近些清：北京华美生科生物技术有限公司产品；二甲基亚年，国内科研工作者在中国特有的药用植物一木兰砜：美国Amresco公司产品；免疫组化试剂盒：科观光木属植物宿轴木兰中也发现了此单体成Caspase一3、

5、NF—KB(一抗工作浓度1：100)购于武分-l，并通过现代色谱手段对木兰科观光木属植汉博士德生物有限公司；PBS缓冲液：购于武汉博士物宿轴木兰的所有单体成分的抑瘤活性进行分析，德生物有限公司。发现在木兰科观光木属植物宿轴木兰的所有单体成1．2主要设备分中，小白菊内酯的抑瘤活性最强．4J。近些年的超净台：上海净化设备厂；二氧化碳培养箱：研究表明：小白菊内酯对很多种肿瘤都有抑瘤活性，USA产品，TC2323—2E型；倒置显微镜：日本Olym一如乳腺癌、胆管癌等，但目前针对现有文献来pus产品；离心机：Heraeus公司产品；酶联免疫检测讲，有关小白菊内酯对人肝癌HepG一2细胞株作用仪

6、：TECAN型号infiniteM200PRO；光学显微镜：日本影响的报道很少，这样就促使了我们对小白菊内酯Olympus产品。作用于人肝癌HepG一2细胞的进一步研究。本论1．3细胞株与细胞培养文中用体外培养的方法培养人肝癌HepG一2细胞；人肝癌HepG一2细胞株购于北京华美生科生用四唑盐比色法(MTF法)检测小白菊内酯对人肝物技术有限公司。人肝癌HepG一2细胞以适量浓癌HepG一2细胞的抗增殖及细胞毒作用；用倒置显度接种于含10％胎牛血清和100U／mL青霉素一链微镜、光学显微镜等观察小白菊内酯作用人肝癌霉素溶液的RPMI一1640培养基中，置于温度37℃，HepG一2细胞前

7、后细胞形态的改变；用免疫组织化二氧化碳浓度为5％及饱和湿度95％的二氧化碳培学染色法通过检测药物作用前后细胞内相关基因蛋养箱中进行培养，每3天传代一次。白Caspase一3、NF—KB蛋白阳性表达变化的情况来1．4Mr丌比色法测定细胞增殖抑制率探讨小白菊内酯诱导细胞凋亡的可能机制。本研究将对数生长期的细胞接种于96孑L板中，每孔以人肝癌HepG一2细胞为靶细胞，研究小白菊内酯1801~L的细胞悬液，于温度37cc，二氧化碳浓度为对人肝癌HepG一2细胞的C