瓦勒变性坐骨神经段对大鼠BMSCs向SCs分化的影响.pdf

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1、·1946·中国病理生理杂志ChineseJournalofPathophysiology2014，3o(11)：1946．1953[文章编号]1000-4718(2014)11．1946．08瓦勒变性坐骨神经段对大鼠BMSCs向SCs分化的影响木赵富生，武庚，武杨，金秀东，张际绯，李月珍l牡丹江医学院，牡丹江医学院红旗医院，黑龙江牡丹江157011)[摘要]目的：通过观察瓦勒变性坐骨神经段对大鼠骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemeeHs，BMSCs)增殖、分泌功能以及向施万细胞(Sehwannc

2、ells，SCs)分化的影响，探讨其在BMSCs向SCs分化中的作用及可能的机制。方法：采用全骨髓贴壁法分离、培养SD大鼠BMSCs，并采用免疫荧光法鉴定。应用Transwell建立坐骨神经段与BMSCs双层培养体系，将实验分为瓦勒变性坐骨神经段与BMSCs联合培养组(A组)、正常坐骨神经段与BMSCs联合培养组(B组)和BMSCs单独培养组(c组)。倒置相差显微镜观察联合培养过程中BMSCs形态变化；免疫荧光染色检测联合培养第7天各组BMSCs表达S-100情况；联合培养第0⋯147、11、14天，利用细胞计数法绘制各组BMSC

3、s生长曲线，ELISA法检测各组培养液上清中神经生长因子(nervegrowthfactor，NGF)含量，实时荧光定量PCR检测各组BMSCs中S-100mRNA表达情况。结果：成功分离培养BMSCs，免疫荧光鉴定BMSCs呈CD29、CD44和CDg0表达阳性。联合培养第7天倒置相差显微镜观察可见，A组BMSCs胞体回缩，呈梭形，并带有突起，形态类似SCs；B、C组大部分BMSCs形态无明显变化。联合培养第7天免疫荧光染色示，A、B、C组BMSCsS-100阳性表达率分别为31．1％±2．9％、16．2％±1．7％和0．42％

4、±0．07％，A组阳性表达率明显增高(P<0．05)。各组BMSCs生长曲线均近似⋯S’形，从第4天开始，A组BMSCs增殖速度明显快于B、C组(P<0．05)；ELISA法检测示，A组NGF含量呈时间依赖性增加，于联合培养第7天达高峰，随后呈下降趋势。B、C组NGF含量随共培养时间延长有所增加，但显著低于A组(P<0．05)；实时荧光定量PCR检测示，联合培养第4、7、11、14天，A组S-100mRNA表达明显高于B、C组(P<0．05)。结论：瓦勒变性坐骨神经段能有效促进大鼠BMSCs增殖并诱导BMSCs向SCs样细胞分化，

5、联合培养过程中NGF可能参与BMSCs向SCs分化的调控。[关键词]瓦勒变性；坐骨神经；骨髓间充质干细胞；施万细胞；分化[中图分类号]R363．14[文献标志码]Adoi：10．3969／j．issn．1000．4718。2014．11．005EfectsofWallerdegenerativesciaticnervesegmentsondiferentiation0fBMSCSintoSCsinratSZHAOFu—sheng，WUGeng，WUYang，JINXiu—dong，ZHANGJi．fei，LIYue．zhen(。M

6、udanjiangMedicalCollege，HongqiHospitalAffiliatedtoMudanjiangMedicalCollege，Mudanjiang157011，China．E—mail：liyuezhennv@163．corn)[ABSTRACT]AIM：ToobservetheeffectsofWallerdegenerativesciaticnervesegmentsontheabilityofprolifer-ationandsecretioninratbonemarrowmesenchymalste

7、mcells(BMSCs)aswellasthedifferentiationofBMSCsintoSchwanncells(SOs)underCO．culturecondition．METHODS：BMSCswereisolatedfromSDratsandidentifiedbyimmu．nofluorescence．InTranswellco—culturesystem，thedegenerativeratsciaticnervesegmentsandBMSCswereCO—culturedintheTranswellins

8、ertsandwellplates，respectively．Theexperimentsweredividedinto3groups：groupA，degenerativesci·aticnervesegmentsCO-culturedwithB