碳粒廓清实验.ppt

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1、小白鼠碳粒廓清实验问题：1.这个实验是一个什么性质的实验？或者说通过这个实验反应哪个方面的功能？问题1答案：这个实验反应的是机体的免疫方面的功能，反应的是巨噬细胞的吞噬功能。问题：2.机体免疫功能包括那几个方面？巨噬细胞的吞噬功能属于哪个方面的功能问题2答案：机体免疫功能包括体液免疫，细胞免疫和非特异免疫功能？巨噬细胞的吞噬功能属于非特异免疫功能化学物对免疫系统的影响：免疫抑制超敏反应自身免疫反应机体的免疫系统包括主要免疫器官或组织，免疫细胞和免疫分子；免疫器官或组织包括中枢免疫器官（骨髓和胸腺）和外周（脾脏和淋巴结）要

2、反应机体的免疫功能，包括很多方面，比如体液免疫功能，细胞免疫功能，NK和巨噬细胞的吞噬功能等等，因此需要一组实验来说明机体的免疫功能，不能单凭一个实验。检测的方法也有很多，比如免疫器官的重量和脏器系数；TB淋巴细胞的分型（流式细胞仪）；放射免疫方法等。我们今天做的实验是我们学系老师自创的一种方法：碳粒廓清实验一目的要求学习碳廓清实验的原理与方法；进步练习小鼠的眼眶后静脉丛注射二基本原理一定浓度的碳粒经小鼠眼眶后静脉丛注射进入血液，经血流带到肝，脾等处，而被这些部位的巨噬细胞吞噬清除。在一定浓度范围内，碳粒的清除速率与其剂

3、量成呈指函数关系，即吞噬速度与血液中碳粒浓度成正比，而与已吞噬的碳粒量成反比。若以血中碳粒浓度的对数值为纵坐标，时间为横坐标，两者则呈直线关系，其斜率（k）值表示吞噬速度，即未经校正的吞噬指数。这是因为小鼠肝，脾重量不等，故k值不同，所以，一般以校正的吞噬指数α表示，反映了每单位组织重量的吞噬活性。计算公式如下：α＝体重/(肝重+脾重）×K1/3四操作步骤小鼠称重用印度墨汁，按小鼠每10g体重0.1ml计算，经左眼眼眶后静脉丛注入体内，注射完毕，立即计时(注意注射的深度和力度）。注入墨汁后2~20分钟内选两个时点（例如2

4、分钟，10分钟，可以自定时间，但两次间隔时间要长一些），用预先肝素处理的毛细管分别从右眼眶静脉丛取血20μl，置入盛有3mlNaCO3溶液的试管中，摇匀。用0.5cm比色杯在721分光光度计600nm波长处测光密度（OD），用0.1％NaCO3溶液为空白。处死小鼠，取肝，脾称重（若肝脾皆变黑，说明注射成功）。五计算与结果按下式计算吞噬指数αK=（lgOD1-lgOD2）/(t2-t1)为未经校正的吞噬指数。OD1为t1（例如2分钟）血标本的OD值OD2为t2（例如10分钟）血标本的OD值吞噬指数α＝体重/(肝重+脾重）×

5、K1/3六注意事项静脉注入碳粒的量，取血时间，取血量一定要准。墨汁经放置，碳粒沉于瓶底，临用前应摇匀。因每只小鼠要连续取血数次，所以每次眼眶内取血时，应尽量减少出血。对于吞噬指数α该如何评价，它是不是也有个正常值呢？