食品中单核细胞增生李斯特氏菌检验方法的探讨.pdf

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1、食品中单核细胞增生李斯特氏菌检验方法的探讨●国家农副加工产品及白酒质量监督检验中心山西省食品质量安全监督检验研究院赵海霞单核细胞增生李斯特氏菌简介单核细胞增生李斯特氏菌是一种能引起人畜共患病的病原菌。人畜感染此菌后病症主要表现为败血症、脑膜炎和胃肠炎等，孕妇感染此菌后症状通常表现温和，但经常会引起流产、死产或早产。感染该菌的孕妇生出的婴儿常感染上述病症，导致很多婴儿死亡。由于单核细胞增生李斯特氏菌在4℃冰箱保存的食品中仍可生长繁殖，使其危害性更进一步增大，是冷藏肉制品主要的食源性致病菌之一，GB29921—2013(食品安全国家标准食品中致病菌限蟊》中明确

2、规定熟肉制品和即食生肉制品中不得检出该菌，此标准将于2014年7门1广J正式实施。单核细胞增生李斯特氏菌为革兰氏阳性短杆菌，大小为(0．4~0．5)／zm×(1．0-2．0)／xm，形状直或稍弯，两端钝圆、常呈v字形排列，偶呈球状、双球状，兼性厌氧、无芽孢，一般不形成荚膜，但在营养丰富的环境中可形成荚膜，在220(2～25％2的环境下形成4根鞭毛，在32~(2的环境下仅形成1根鞭毛，动力缓慢。检验方法简介及注意事项1．检验方法简介按照GB4789．30-2010，单核细胞增生李斯特氏菌检验有4个基本步骤：增菌(LB1增菌液，30±1℃，24h)；二次增菌(

3、LB2增菌液，30±1℃，18h-24h)；选择性平板分离(李斯特氏菌显色培养基和PALCAM，36±1℃，24h～48h)；初筛(木糖和鼠李糖试验)；鉴定(染色镜检、动力试验、生化鉴定、溶血试验和协同溶血试验)。2．注意事项(1)增菌单核细胞增生李斯特氏菌检验需两次增菌，沙门氏菌检验也需53两次增菌，但目的截然不同。沙门氏菌的两次增菌分为上也出现蓝色菌落，但菌落周围没有不透明环。前增菌和选择性增菌，前增菌使用的培养基是BPW，目(3)初筛及纯培养的是使受损细胞恢复，增强活力；选择性增菌使用的培自PALCAM平板上和李斯特氏菌显色培养基平板上养基是TTB和

4、SC，目的是使杂菌被抑制，沙门氏菌数量挑取5个以上典型或可疑菌落，分别接种在木糖、鼠李增多。单核细胞增生李斯特氏菌两次增菌所使用的LB1糖发酵管，同时在TSA—YE平板上纯化，取木糖阴性、和LB2增菌液基础培养基和添加剂一致，只是比例不同，鼠李糖阳性、TSA—YE平板上菌落是淡蓝色的可疑菌溶，选择二次增菌是将单核细胞增生李斯特氏菌最大化培养对其继续作鉴定。出来，增菌液只有选择性没有区别性。(4)鉴定(2)分离①染色镜检①PALCAM琼脂平板将单核细胞增生李斯特氏菌用生理盐水制成菌悬液，单核细胞增生李斯特氏菌典型菌落为1．5mm-2．5na31~在油镜下观察

5、，该菌出现轻微旋转或翻滚样的运动。需的圆形灰绿色菌落，周围有棕黑色水解圈，有些菌落有注意用培养时间少于24h的单核细胞增生李斯特氏菌，黑色凹陷。否则不易观察。PALCAM培养基是强选择性培养基，其中加入了氯②动力试验化锂、多粘菌素B、盐酸吖啶黄和头孢他啶，氯化锂抑制将TSA—YE平板上的疑似菌落穿刺接种到SIM培养革兰氏阴性菌生长，其余3种抑菌剂抑制除李斯特氏菌基中，于30~C培养24h～48h，李斯特氏菌有动力，呈伞外的革兰氏阳性菌生长。状生长。偶尔也发现动力现象不易观察，因为个别SIMPALCAM培养基是区别性培养基，其中加入的柠檬动力培养基琼脂含量太

6、高，导致培养基很硬，这时需适酸铁铵和七叶甙起到了区别作用，李斯特氏菌可以水解时调整琼脂含量，通常在配制SIM培养基时添加营养肉七叶甙，与培养基中的铁离子反应，使培养基变黑，即汤使其与SIM培养基的比例为1：9，培养基变软，容易菌落周围呈现棕黑色水解圈。观察结果。单核细胞增生李斯特氏菌和英诺克李斯特氏菌在该③生化鉴定培养基上典型菌落均为1．5nun～2．5ITUTI的圆形灰绿色菌表1单核细胞增生李斯特氏菌生化特征落，周围有棕黑色水解圈，有些菌落有黑色凹陷，不同点是英诺克李斯特氏菌分解七叶甙的能力更强，菌落周菌种过氢氧酶化葡萄糖麦芽糖MR—VP甘露醇七叶甙围的

7、棕黑色水解圈比单核细胞增生李斯特氏菌的棕黑色单核细水解圈更大。胞增生李斯特+++}++②李斯特氏菌显色培养基氏菌李斯特氏菌典型菌落呈现蓝色，大小约1·，菌落周围有一不透明环。过氧化氧酶试验：过氧化氢酶又称接触酶，能将水李斯特氏显色培养基为选择鉴别性培养基，培养基分解而释放氧气，大多数好氧或兼性厌氧微生物能产生中的蛋白胨提供氮源和氨基酸，氯化钠维持渗透压，琼过氧化氢酶，单核细胞增生李斯特氏菌的过氧化氢酶试脂是凝固剂，氯化锂抑制革兰氏阴性菌生长，抑菌剂抑验阳性。制除李斯特氏菌外的革兰氏阳性菌生长。菌溶周同不透糖醇类发酵试验(葡萄糖、麦芽糖、甘露醇试验)：明环是

8、由于酶的作用引起的，其原理主要是此酶巾毒力不同的微生物可对各种糖类