神经节苷脂联合依达拉奉对局灶性脑缺血再灌注大鼠PDK1、GSK3β蛋白表达的影响.pdf

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1、·302·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2015Mar；50(3)神经节苷脂联合依达拉奉对局灶性脑缺血再灌注大鼠PDK1、GSK313蛋白表达的影响李晓艳，周农摘要目的观察单唾液酸神经节苷脂(GM1)联合依达拉蛋白激酶-1(3一ph0sph0in0sitidedependentproteinki-奉对局灶性脑缺血再灌注大鼠缺血半暗带区PDK1、GSK313nase1，PDK1)通过磷酸化Akt使其活性增强；糖原蛋白表达的影响，探讨其可能的作用。方法随机将大鼠分合成酶激酶-3B(glycogensynthasekinase一3p

2、，为假手术组、模型组、GM1组(剂量20mg／kg，腹腔注射，1GSK3B)是PI3K／Akt通路下游分子，可以通过Bcl一2次／d)、依达拉奉组(剂量3ms／kg，腹腔注射，2次／d)、GM1家族来诱导凋亡_4J。该实验采用线栓法制作局灶联合依达拉奉组，采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌性脑缺血再灌注大鼠模型，观察GM1联合依达拉奉注模型，分别对缺血2h后再灌注3、7、14d，采用免疫组化对模型大鼠缺血半暗带PDK1、GSK3B蛋白表达的Envision两步法检测大鼠模型缺血半暗带PDK1、GSK313蛋影响，探讨其对脑缺血神经细胞凋亡的影响。白表达的阳性细胞平均吸收光密度

3、和阳性面积单位。结果在缺血半暗带，再灌注3、7、14d各时间点，GM1联合依达1材料与方法拉奉组PDK1蛋白表达平均吸收光密度和阳性面积单位分别显著高于GM1组、依达拉奉组(P<0．05)、模型组(P<1．1动物分组健康SD大鼠105只，南京医科大0．叭)，GSK3B蛋白表达平均吸收光密度和阳性面积单位分学实验动物中心提供，雌雄各半，月龄4个月，280别显著低于GM1组、依达拉奉组(P<0．01)、模型组(P<—320g，随机分为假手术组、模型组、GM1组、依达0．O1)。结论GM1联合依达拉奉能增强缺血半暗带PDK1拉奉组、GM1联合依达拉奉组，每组21只，缺血2h蛋白表达，

4、抑制GSK313蛋白表达。后，再分别分为再灌注3、7、14d3个亚组。关键词单唾液酸神经节苷脂；依达拉奉；脑缺血；3一磷酸肌1．2局灶性脑缺血再灌注模型复制采用线栓法醇依赖性蛋白激酶一1；糖原合成酶激酶-313；凋亡阻塞大鼠左侧大脑中动脉，制作局灶性脑缺血再灌中图分类号R743注大鼠模型，缺血2h后，分别再灌注3、7、14d，假文献标志码A文章编号1000—1492(2015)03—0302—05手术组仅作血管分离，具体方法参照文献J。1．3药物与试剂GM1由山东齐鲁制药有限公司脑血管疾病以高发病率、高复发率、高致残率、提供(规格：20ms／2ml，批号：4010081)，依达

5、拉奉高死亡率的特点，成为当前疾病3大死亡原因之一。注射液由吉林博大制药有限责任公司提供(规格：而细胞凋亡是脑缺血中最重要的病理生理机制之30ms／20ml，批号：01．140112)。PDK1、GSK3B一抗一，其主要发生在病灶周围的半暗带区，抑制脑缺血购自美国SantaCruz公司，DAB显色试剂盒、Envi—后细胞凋亡也成为抗缺血治疗的重要手段。研sion两步法试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公究⋯表明单涎酸神经节苷脂(monosialoganioside，司。GM1)能通过清除氧自由基、改善细胞内钙超载而起1．4给药剂量与方法依达拉奉注射液，剂量3到抗神经细胞凋亡的作用。

6、依达拉奉是一种自由基mg／kg，应用生理盐水稀释成浓度1ms／ml，腹腔注清除剂，可有效提高大鼠局灶性脑缺血时脑组织中射，2次／d；GM1，剂量20mg／kg，用生理盐水稀释超氧化物歧化酶(SOD)活力，降低丙二醛(MDA)水成浓度1ms／ml，腹腔注射，1次／d。假手术组、模型平，并且有效抑制caspase一3表达，对抗神经细胞凋组用等量0．9％生理盐水腹腔注射。亡。近年来，PI3K／Akt信号通路在脑缺血神经元1．5取材分别于再灌注的3、7、14d，10％水合凋亡的调节作用备受关注J，而3．磷酸肌醇依赖性氯醛麻醉(3．6ml／kg体重，ip)大鼠，打开胸腔，于右2014—1

7、2—31接收心耳部剪一小口，从左心室插人导管至主动脉，向内作者单位：安徽医科大学第一附属医院神经内科，合肥230022快速注入37℃肝素化NS250ml，至右心耳流出液安徽省第二人民医院神经内科，合肥230011变清亮，然后注入4OL多聚甲醛磷酸盐缓冲液作者简介：李晓艳，女，硕士研究生；250ml，灌流固定30min后断头取脑，除去小脑和脑周农，男，主任医师，责任作者，E·mail：zhounong@fox—Inailcom干，取大脑，放人40g／L多聚甲醛磷酸盐缓冲液中安徽医科大学学报Ac