神经干细胞对AD大鼠行为及突触素Ⅰ表达的影响.pdf

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1、第38卷第3期黑龙江医药科学V01．38No．32015年6月HEIL0NGJIANGMEDICINEANDPHARMACYJun．2015·1·神经干细胞对AD大鼠行为及突触素I表达的影响①杜红蕾。宋春雨。魏春杰，王泽宇。韩凤，杨晓玉。盛宝英(佳木斯大学附属第一医院神经内科，黑龙江佳木斯154003)摘要：目的：探究神经干细胞(NSCs)移植对B一淀粉样蛋白(A131—42)诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆能力及海马组织内突触素I表达的影响。方法：采用一淀粉样蛋白(A131—42)注射到大鼠海马组织内建立阿尔茨海默病(AD)大鼠动物模型，通过Y迷宫测试大鼠学习

2、记忆能力和Westernblot技术检测大鼠海马组织内SynapsinI表达。结果：与对照组比较．AD模型组、细胞移植组大鼠学习记忆和大鼠海马组织内SynapsinI蛋白表达量均低(P<0．05)，与AD模型组比较，细胞移植组大鼠学习记忆能力和大鼠海马组织内SynapsinI蛋白表达量均较高(P<0．05)。结论：NSCs能显著改善AD大鼠的学习记忆能力，可能与上调突触素I的表达有关。关键词：神经干细胞；移植；阿尔茨海默病；突触素I中图分类号：R338．1；R742．82文献标识码：A文章编号：1008—0104(2015)03—0001—03阿尔茨海默病(Alzhe

3、imer’Sdisease，AD)俗称Cruz)，辣根过氧化物酶标记的抗兔IgG抗体(Santa老年痴呆症，是一种以认知功能障碍为主要临床表Cruz)、p—actin鼠单克隆抗体(北京康为世纪)、现的神经系统退行性疾病，其病因及发病机制目前HRP标记抗山羊IgG(武汉博士德)；A131—42(美国尚不十分清楚，目前临床药物治疗该疾病的效果不Sigma公司)主要仪器：CO恒温培养箱(Thermo甚理想。现有关神经干细胞(Neuralstemcells，Forma公司)，Y型电迷宫(张家港生物医学仪器NSCs)治疗老年痴呆症在动物实验取得了可观的疗厂)，大鼠立体定向仪SN

4、2型(日本东京成茂科学器效_1]。突触素I(SynapsinI)是突触素家族最早发械研究所)，垂直电泳槽(北京六一仪器厂)，转膜仪现位于突触囊泡膜上的一种特异性磷酸化神经蛋白(德国GE公司)。质，它在突触可塑性和神经信号传导过程中发挥了1．3AD动物模型制备、神经干细胞培养及移植重要的作用，它的表达与突触的再生、延伸与其功能1．3．1AD动物模型制备的恢复有关j。突触连接是神经元细胞间信息传采用B一淀粉样蛋白(A131—42)诱导方法制备递的重要结构，也是生物学习和记忆的神经生物基AD模型J：在无菌操作下把A131—42溶于生理盐础；Synapsin1分布可间接的反应

5、突触连接的数量及水中，置于37℃孵育7d以上，使其形成聚集状态的密度，突触素I的变化情况能准确的映射出神经元AB备用；大鼠10％水合氯醛腹腔注射麻醉成功后，突触的改变，是突触重塑的理想标志J。本实验通将其固定在立体定位仪上，术区常规消毒，参照包新过NSCs移植到AD模型大鼠海马组织中，观察对大民等的《大鼠脑立体定位图谱》，选择双侧海马区鼠学习和记忆能力及海马组织中SynapsinI蛋白表作为注射靶区，位置距前囟向后3．0mm、中线侧开达的影响，为探讨AD疾病具体发病机制提供实验2．2mm处，用微型钻头钻开颅骨，垂直于大脑表面依据。用微量进样器进针2．8ram，然后将5

6、呈聚集状态1材料和方法的AI3以每分钟1速度缓慢注人，留针时间不少1．1实验动物及分组于10rain。逐层缝合切口，术后每天腹腔注射抗生10周龄成年Wistar大鼠30只和孕期为素，饲养7d后行Y迷宫测试，学习和记忆认知能力14dWistar大鼠1只，体重(230±10)g，SPF级；所有降低则表明制模成功。大鼠均由佳木斯大学实验动物中心提供和饲养，实1．3．2神经干细胞体外培养验过程符合我国相关伦理学规定。3O只大鼠随机NSCs培养方法参照文献：取孕2周的Wistar分为：细胞移植组、对照组、AD模型组，每组各10大鼠腹腔麻醉后断颈处死，在无菌操作下行剖宫取只。，出

7、胚胎，分离得到全脑组织后用HBSS液反复冲洗；1．2试剂及仪器用无菌剪刀将全脑剪成小块组织，加入0．25％胰酶主要试剂：DMEM／F12(北京康为世纪)、胰蛋白消化后，用巴氏吸管反复多次吹打，使其成为单细胞酶(北京中杉)；多克隆兔抗突触素I抗体(Santa悬液，转人含有bFGF和EG培养基的培养瓶中，放①基金项目：黑龙江省教育厅科学技术研究项目，编号：12531698；黑龙江省高校科技创新团队项目，编号：2012TD013；佳木斯大学研究生创新基金，编号：LZR2014_o18。作者简介：杜红蕾(1988～)女，黑龙江铁力人，在读硕士研究生。通讯作者