牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定.pdf

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1、第32卷第7期中国预防兽医学报Vo1．32．No．72010年7月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineJu1．20l0牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定聂明非，李岩，温凯，贾莹，王君伟(东北农业大学动物医学院，黑龙江哈尔滨150030)摘要：为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)~特异性单克隆抗体(MAb1，用含有BVDVE2基因的真核表达质粒pcDNA—E2免疫4周龄～6周龄BALB／c鼠，取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0进行融合，以BVDV作为抗原建立间接ELISA筛选及

2、4次连续克隆获得3株能稳定分泌抗E2MAb的杂交瘤细胞系，分别命名为2E2、3D12、4D6。MAb亚类鉴定表明，2E2和4D6为IgM类，3D12为IgG2a亚类，轻链均为K链。经westernblot和间接免疫荧光检测证明3株MAb针对E2的构象表位，并且3D12株MAb能与BVDV及猪瘟病毒(CSFV)结合，2E2和4D6MAb只能与BVDV结合。关键词：BVDV；E2；单克隆抗体；CSFV中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008—0589(2010)07．0570—04■’‘t0■‘■●0J■，0■●■■■0

3、reparationanalaentiticatl0nOfmonoCl0naIantlbOaleSagainstE2proteinofBovineviraldiarrheavirusNIEMing—fei，LIYan，WENKai，JIAYing，WANGJun-wei(CollegeofVetefina~Medicine，NortheastAgnculturalUniversity，Harbin150030，China)Abstract：Inordertopreparemonoclonalantibodies(MAbs)agains

4、tBovineviraldiarrheavirus／mucosaldiseasevirus(BVDV)，BALB／cmicewereimmunizedwithpcDNA—E2，andthemousespleniccellsfusedwithSP2／0cells．HybridomacellswerescreenedbyELISAusingBVDVascoatingantigen，clonepurifiedandcharacterized．Threehybridomacellsstablysecretinganti—E2MAbs2E2，3

5、D12，4D6，respectivelywereobtained．IdentificationofimmunoglobulmtypeofMAbsshowedthat2E2and4D6wereIgMtypewithKchain，3D12wasIgG2asubtypewithKchain．WesternblotandindirectimmunofluorescenceindicatedthatallMAbswerespecifictotheE2conformationalepitopes．The3D12MAbwasabletoreactw

6、ithBVDVandCSFV．However，2E2and4D6couldonlyreactwithBVDV．Keywords：BVDV；E2；monoclonalantibodies；CSFV牛病毒性腹泻(Bovineviraldiarrhea，BVD)是由整个基因组含有一个大的开放阅读框架(0RF)和两BVD病毒(BVDV)引起的一种以腹泻、黏膜病、持侧的非翻译区(uTR)1。续感染、免疫抑制以及母畜流产为主要症状的接触E2fgP53)位于BVDVORF2077位～3198位核性传染病Il1。该病呈全球性分布，给养牛业造成了苷酸，

7、由374个氨基酸残基组成，有5个可能的N．很大的经济损失。BVDV与猪瘟病毒(CSFV)、羊边端糖基化位点，这些位点在BVDV不同毒株中非常界病病毒(BDV)同属黄病毒科瘟病毒属成员，其保守，去糖基化分子量约为42kuI1。E2与E和基因组为单股正链RNA，全长约l2_3nt～12．5nt[2]，E1是病毒的结构蛋白，形成表面突起伸向囊膜表面。*Correspondingauthor收稿日期：2009—11-23基金项目：现代农业产业技术体系专项资金(NYCYTX一0303)作者简介：聂明~(1984一)，女，河北承德人，硕士研究生，

8、主要从事兽医免疫学与生物制品学研究通信作者：E—mail：jwwang@neau．edu．cn第7期聂明非，等．牛病毒性腹泻病毒E2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定571在BVDV所有结构蛋白之中，E2蛋白是免疫原性1．4．1