酶联免疫吸附实验检测HIV抗体影响因素探讨.pdf

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1、·技术与方法·2012年1月第50卷第2期酶联免疫吸附实验检测HIV抗体影响因素探讨毕秀欣(辽宁省丹东国际旅行卫生保健中心，辽宁丹东118000)【摘要】通过对酶联免疫吸附实验检测HIV抗体的检测前、检测中和检测后各相关影响因素的分析，探讨各因素对结果的影响，以便寻找解决的方法和加强质控管理，从而保证检测结果的准确性和精确性。【关键词】酶联免疫吸附实验；HIV抗体；影响因素【中图分类号】R446．61【文献标识码】B【文章编号】1673—9701(2012)02—0076—02Theimpactfactorsofenzyme-linkedimmunosorbentassayindet

2、ectionofHIVantibodiesBIXiuxinInternationalTravelHealthCareCenterofDandonginLiaoningProvince，Dandong118000，China【Abstract】Byanalysisofallrelevantfactorsinpre—test，duringtestandpost—testofenzyme-linkedimmunosorbentassay(ELISA)indetectionofHIVantibodies，toexplorethevariousimpactfactorsontheresults

3、，inordertofindasolutionandstrengthenthequalitycontrolmanagement，toensureaccuracyandprecisionofthetestresults．【Keywords】ELISA；HIVantibody；Impactfactors酶联免疫吸附实验因其操作简单、灵敏度高、特异性好、极易失活；底物容易被氧化，产生颜色。因此，必须加强试剂价格低廉等特点成为HIV抗体初筛实验的常用方法。优质的储存管理，防止试剂失活和氧化。的试剂、良好的仪器、正确的操作和高素质的技术人员是保1．2标本证检测结果准确可靠的必要条件。由于ELI

4、SA法检测结果受血清是最常用的标本。酶联免疫吸附实验中标本的质量很多因素影响，其中任何一项因素都可造成HIV抗体结果也是影响结果的关键因素之一，标本的干扰物质容易引起假假阴性和假阳性结果的发生。因此必须加强HIV抗体初筛阳性或假阴性的结果。干扰分为外源性和内源性。外源性干实验室的全面质量控制，保证其结果的准确可靠。笔者从事扰：细菌污染、溶血、凝固不全、反复冻融和标本相互污染等：多年的HIV抗体检测_【作，现将影响因素分析如下。标本放置4℃冰箱冷藏一般不超过5d．如果保存过久，其中的蛋白质可能发生聚合，可使本底加深：冻结的标本要融化1检测前后充分混匀，为防止蛋白质局部浓缩，分布不均，应

5、充分轻轻i．1试剂混匀，避免产生气泡：浑浊或有沉淀的样本应先离心澄清后1．1．1试剂的选择优质的HIV抗体试剂是结果质量的基再检测；防止反复冻融，引起效价降低。内源性干扰：一般包础试剂要从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全括类风湿因子、补体、高浓度的非特异性免疫球蛋白、异嗜性性和经济性做出全面的评价并选择好的试剂，根据实验室抗体及某些自身抗体等，避免内源性干扰因素主要通过选择要求选择灵敏度高(精密度高，CV值<15％)、特异性好的试合适的试剂。①标本溶血时释放大量具有过氧化物酶活性的剂试剂的选择很关键，通过厂家了解试剂包被物的组成，物质，增加了非特异显色，干扰测定结果：②标

6、本被细菌污如原料来源(基因组成或合成多肽)、片段组成(按比例组成染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应；③血或化合组成)、片段长短等来判断抗原、抗体包被的完整性清标本应充分离心，否则可因凝固不全、纤维蛋白原非特异和特异性。根据试剂批号检定报告了解其质量水平和试剂吸附于微孔内而造成假阳性结果。的优劣，还可以室问质评报告中对试剂的评价结果来客观1．3仪器评价、选择适合实验室的试剂。要选择和订购长效批号的试酶联免疫吸附实验中会用到移液器、水浴箱或恒温箱、剂．避免试剂批号改变而重新建立质量控制体系⋯。洗板机、酶标仪等。移液器是一种比较精密的工具，要求比较1．1．2试剂的储存试剂应

7、储存在2～8℃冰箱中，力求温度恒高，必须定期对加样器进行维护和校准[31。每次加样需更换吸定．并防止阳光照射。试剂盒中有3个主要的试剂，即免疫吸嘴，以免交叉污染。水浴箱温度要准确恒定；洗板机要定期维附剂、酶结合物和底物。酶结合物具有生物活性，保存不当，护，检测残液量。76中国现代医生CHINAMODERNDOCTOR2012年1月第5O卷第2期·技术与方法·2检测中时间要力求准确充分．并在规定的时间内比色。防止时间过2．1加样长会褪色。比色时应尽量选用双波