马TRIM5α基因的扩增及抗EIAV作用评价.pdf

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1、第36卷第8期中国预防兽医学报Vo1．36．No．82014年8月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineAug．2014doi：10．3969~．issn．1008—0589．2014．08．09马TRIM5Oc基因的扩增及抗EIAV作用评价蔡伟刚，那雷，刘获荻，马建，尹鑫一，张泽力l，3，艾有为l'3，王晓钧(1．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨150001；2．东北农业大学动物医学院，黑龙江哈尔滨150030；3．东北林业大学野生动物资源学院，黑龙江哈尔滨150040)摘要：TRIM5

2、c~是一种重要的天然免疫因子，能够限制多种逆转录病毒的跨种感染。为研究马的TRIM5仅是否具有抗病毒作用，本实验采用RT．PCR技术从马外周血液细胞的总RNA中扩增TRIM5基因。测序结果表明，与GenBank中唯一的马TRIM5a(eqTR1M5a)基因序列相比马基因组预测的TRIM50l(eqTRIM5．predicted)基因在其c末端部位有208bp片段的插入，该插入造成TRIM5c~的截短突变(eqTRIM5一S)。通过删除插入片段后得到与eqTRIM5c~-predicted基因相同的全长马的TRIM5a(eqTRIM5c~．F)基因。同时将eqTRIM5a．S基

3、因和eqTRIM5ot—F基因分别插入pLPCX-HA真核表达载体中构建重组质粒，并分别转染293T细胞，转染24h后感染马传染性贫血(EIAV)假病毒。通过检测荧光素酶活性，实验结果表明相对于阴性对照组eqTRIM5．s可以有效地降低EIAV假病毒的复制，而eqTR1M5a．F则无该生物学功能。但通过将两种eqTRIM5c~重组质粒与EIAV．gag表达重组质粒共转染293T细胞，结果表明eqTRIM5c~．S和eqTRIM5e~一F均不能降解Gag蛋白，这表明eqTRIM5．s可能存在另一种机制限制EIAV的复制。关键词：马TRIM5c~；马传染性贫血病毒；抗病毒作用；衣

4、壳蛋白；降解作用中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：10080589(2014)08．0620—04ThecloningqofteqiuUineTRIM5：=Io【gqeneand一．theanti-equ。ineinfectiousanemiavirusactivityoftheproteinCAIWei—gang，NALei，LIUDi-qiu，MAJian，YINXin．-，ZHANGZe—li．一，AIYou-wei，WANGXiao-jun(1．StateKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，HarbinVete

5、rinaryResearchInstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences，Harbin150001，China；2．CollegeofVeterinaryMedicine，NortheastAgriculturalUniversity，Harbin150030，China；3．CollegeofWildlifeResource，NortheastForestryUniversity，Harbin150040，China)Abstract：TRIM5ctisanindispensableinnateimmunefactorwhic

6、hiscapabletoblockinterspeciestransmissionofretrovirus．ToinvestigatewhetherequineTRIM5a(eqTRIM5c~)harborsantivirusactivity，theeqTRIM5agenewasamplifiedfromhorsebloodcellsbyRT—PCR，andthesequencingresultshowedthatanonlyeqTRIM5agenewithadditionalinsertionof208bpinCterminalofthegenewasamplifiedwh

7、ichwasdifferentfromthepredictedsequenceofeqTRIM5c~．While，the208bpinsertionofthegeneresultedintheexpressionoftruncatedeqTRIM5ct(eqTRIM5a—S)．Byremovingtheadditionalinse~edsequence，thefulllengthofeqTRIM5agenewascreatedasthepredictedeqTRIM5c~(eqTRIM5c~-F)．In