裸鼹鼠外周血白细胞免疫相关因子mRNA表达水平的检测.pdf

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1、Oct．2014．34(5)实验动物与比较医学LaboratoryAnimalandComparativeMedicine417doi：10．3969／j．issn．1674—5817．2014．05．015裸鼹鼠外周血白细胞免疫相关因子mRNA表达水平的检测林丽芳，肖邦，赵善民，汤球，余琛琳，孙伟，张璐，蔡丽萍，徐晨，程继帅，崔淑芳(第二军医大学实验动物中心，上海200433)[摘要】目的检测生长期和成年期裸鼹鼠外周血白细胞免疫相关因子mRNA表达水平，以了解裸鼹鼠的正常免疫水平。方法通过眼眶静脉丛采集

2、6月龄和12月龄裸鼹鼠外周血，提取外周血白细胞mRNA，反转录成cDNA后，实时定量PCR检测各组裸鼹鼠外周血中白细胞儿1、儿．2、见一4、／L一6、／L-8、／L12、F．0c、上FⅣ_Y的mRNA表达水平。结果除了IFN．Y、IL一4各组间无显著差异，6月龄裸鼹鼠的IL2、TNF．0c显著高于12月龄裸鼹鼠，尤其是6月龄雄性裸鼹鼠的表达水平显著较高。而细胞因子IL一1，IL一6中，6月龄雄性裸鼹鼠的表达水平也显著高于12月龄裸鼹鼠。另外，对细胞因子IL．8、IL．12表达检测结果表明，12月龄雌性裸鼹

3、鼠的IL一8表达水平最低，而12月龄雄性裸鼹鼠的IL—l2表达最低。结论生长期雄性裸鼹鼠的细胞免疫水平和体液免疫水平均高于同龄的雌性动物和成年动物。【关键词】裸鼹鼠；免疫因子；正常免疫水平；白介素【中图分类号]Q95—33[文献标识码]A【文章编号】1674—5817(2014)05—0417—05裸鼹鼠人工饲养的个体数达1500的种群中，发现裸鼹鼠自发癌症的例子。裸鼹鼠的诸多特性使最老的个体年龄超过3O岁，2O岁左右的动物普遍其成为相关研究领域的热点，尤其是对其抗肿瘤特身体状态良好Ⅲ。超过25岁龄的裸鼹

4、鼠显现虚弱的性和缓慢的衰老现象机制的探索将给肿瘤和衰老科迹象，大都死于老年病【。但是，裸鼹鼠死于癌学的研究翻开新的篇章。症的情况从未发现，解剖结果也从未发现肿瘤『3】。Th细胞亚群是一个评估机体免疫平衡状态和另外，大量报道表明裸鼹鼠具有哺乳动物罕见的诸整体免疫能力的综合免疫指标。以分泌IL．2、多特点：其皮肤缺乏P物质，无痛觉；可在低氧IL一12、TNF一0c、IFN一丫为主的Thl群细胞，可以条件下长期生存，具备较强的耐低氧能力；以蜜增强杀伤细胞的细胞毒作用，激发迟发型超敏反蜂式群居，群落中有一个雌性王

5、鼠专门从事繁殖工应，主要介导细胞免疫应答。以表达IL一4、IL一6作；近亲繁殖，但繁殖力旺盛，雌王鼠即使进入和IL．10为主的Th2型细胞，可促进抗体的产生，老年期仍能保持旺盛的生殖能力；从野生环境中主要介导体液免疫应答。当某些因素导致其失衡捕获后进行人工饲养的动物中超过百分之八十的寿时，ThO即可向Th1或Th2转化，并导致机体免命超过24年；具有一定的抗癌机制，至今仍没有疫紊乱，诱发一系列的病理变化，其中包括肿瘤的发生与发展。机体的抗肿瘤免疫以Thl介导的细胞免疫为主，Yamamura等[4]首先发现

6、肿瘤患者体内[收稿日期】2014．08．06[基金项目】上海市科技发展基金项目(No．12140900200)与以Th2型细胞占优势状态即发生了Thl向Th2的漂(No．13140900400)联合资助移。本实验室已对裸鼹鼠进行一系列研究[5-11】，本实【作者简介】林丽芳(1986．)，女，助教，验通过检测裸鼹鼠白细胞中免疫相关因子的mRNAE—mail：linlifang2012@126，corn表达水平，为裸鼹鼠的免疫机制的研究奠定基础。[通讯作者】崔淑芳，教授，E．mail：youngstarsf

7、@163．tom_418实验动物与比较医学LaboratoryAnimalandComparativeMedicine1材料与方法15S，并用实时定量PCR检测系统进行检测。1．4数据分析1．1实验动物数据的表示方式为平均数±标准差，使用2-A△C6月龄和l2月龄的裸鼹鼠各20只，雌雄各半，方法对QPCR数据进行统计。所有的数据使用SPSS由第二军医大学实验动物中心繁殖[SCXK(沪)2012—(SPSSInc．，II，USA)处理，t检验差异显著性，P<0．050003】。为差异统计学意义。1．2仪器及

8、试剂主要仪器有Step．oneRealtimePCR仪(ABI公2结果司)、三气培养箱、超净工作台、高速低温离心2．1部分样品提取的总mRNA跑胶结果机、恒温干燥箱、分光光度计等。主要试剂有反将部分样品提取的总mRNA于l％琼脂糖跑胶转录试剂盒、RealMasterMix(SYBRGreen)均购白天15min。mRNA的28S，18S条带清晰可见，但未根生化科技公司。见5S条带。总体上该mRNA未分解，可用于接下1．3实验方