反相高效液相色谱法测定卤肉制品中亚硝酸盐.doc

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1、一.反相高效液相色谱法测定卤肉制品中硝酸盐及亚硝酸盐　1 实验部分　　1.1 主要试剂与仪器　　甲醇(光谱纯);去离子水(18.36MΩ／cm);饱和硼砂溶液(50.0g／L，称取5.0硼酸钠(Na2B4O710H2O)，溶于100ml热水中，冷却后备用)亚铁氰化钾溶液(106.0g／L，称取106.0g用水溶解，并稀释至1000ml);醋酸锌溶液(220.0g／L，称取220.0g加30ml冰乙酸溶于水，并稀释至1000ml);硝酸盐标准溶液(200mg／L，准确称取0.2000g于110～120℃干燥恒重的硝酸钠，加水溶解

2、，移于1000ml容量瓶中，并稀释至刻度，至于冰箱保存);亚硝酸盐标准溶液(200mg／L，准确称取0.1000g于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解并稀释至500mL);岛津LC-10A液相色谱仪(Class-VP5.0型二极管阵列检测器、LC-10A溶剂输送泵、HS色谱数据工作站V6.2)：0.45um微孔滤膜；艾科浦U系列纯化水机(AWJ2b-10-U)　　1.2色谱条件色谱柱 　　Shim-packCLC-ODSφ6×150mm;预柱：Shim-packG-ODS;流动相：甲醇+1.25mmol／L混合磷酸盐，

3、含3mmol／L四丁基溴化铵，配比为15+85;流速：1.0mL／min;柱温：25℃；检测波长220nm;进样量：20uL：保留时间定性，峰面积外标法定量。　　1.3样品预处理　　称取5g左右样品经绞碎混匀的试样于100mL烧杯中，加12.5mL硼砂饱和液搅拌均匀，以70℃左右的水约300mL将试样洗入500mL容量瓶中，于沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温，然后一面转动，一面加入5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入5mL醋酸锌溶液，以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀，静置片刻。取上清夜经0.45μm滤膜滤过，待测。　　1.

4、4 标准曲线的制作 　　配制系列浓度的标准溶液，采用多点线性校正，建立峰面积-浓度标准曲线或直线回归方程。根据IUPAC的规定倍噪音为样品检出限。本方法的线性范围、相关系数、检出限如表1所示。表1 方法的线性浓度范围，相关系数和检出限组分线性浓度范围(略)　　2结果与讨论　　2.1 色谱条件的选择 　　比较了几种比例流动相，分别为甲醇：盐水溶液(10:90)、甲醇：盐水溶液(15:85)、甲醇：盐水溶液(18:82)，发现甲醇：水溶液(15:85)条件下亚硝酸盐及硝酸盐和样品中干扰物能达到较好的基线分离，并且亚硝酸盐峰之前的负

5、峰对测定无干扰；改变流动相流速，当流速为1.0mL／min亚硝酸盐及硝酸盐出峰时间合适，峰形较好；在方法测试条件下，亚硝酸盐和硝酸盐测得的灵敏波长分别为214、213nm，为避免低紫外波长的影响，使色谱基线稳定，故定为220nm［5］。综合考虑，确定测定的色谱条件为：流动相为甲醇：盐水溶液(15:85)，流速1.0mL／min，柱温25℃，检测波长220nm，进样量为20μL，测定结果令人满意。表2 精密度试验结果(略)　　2.2 精密度和回收试验精密度试验　　分别配制低、中、高浓度三种标准溶液，各进行7次测定，亚硝酸盐RSD

6、为0.45％～2.6％，硝酸盐RSD为0.36％～2.0％，结果见表2;采集市场售卖的卤肉制品，加入不同量的标准溶液进行测定，亚硝酸盐回收率为88.9％～99.1％，硝酸盐回收率为86.3％～98.6％，结果见表3。表3 样品中亚硝酸盐和硝酸盐加标回收率试验结果(略)　　2.3方法可靠性试验 　　对同—样品用本法与国标法同时测定亚硝酸盐和硝酸盐两组分，通过F检验和t检验，本法与国标法所测定的结果均无显著性差异，并且操作简便，易于掌握。结果见表4。表4 样品中亚硝酸盐和硝酸盐含量两种方法的测定结果比对(略)　　3小结      

7、 　　　　本法能够同时测定卤肉制品中硝酸盐和亚硝酸盐含量，具有快速、准确、灵敏、线性范围大等优点，样品中的其他组分如色素、动物性蛋白等对其检测不构成干扰，与国家标准法比较，测定结果无显著性差异。对已装备了液相色谱仪的实验室，本方法扩展了仪器的检测范围，并且大大提高工作效率，很值得推广。二.反相高效液相色谱法同时测定酱腌菜中亚硝酸盐和硝酸盐1　材料与方法1·1　主要仪器与试剂Agilent1100分析型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司),包括AgilentChemStation色谱工作站、四元梯度泵、真空脱气箱、恒温柱温箱、可变波

8、长检测器(VWD)。色谱柱:250×4·6mm,5μm,CapcellPAKC18柱。MilliporeMilli-Q系统(MolsheimFrance),CQ-6超声波清洗器(上海沪超超声波仪器有限公司),pHS-3F酸度计(上海电子光学技术研究所)。Envi-Carb柱(