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1、简述题1.串联亲和纯化方法(Tandemaffinitypurification,TAP) 串联亲和纯化技术是一种能快速研究体内蛋白质相互作用的新技术，经过两步特异性亲和纯化可快速得到生理条件下与靶蛋白质存在真实相互作用的蛋白质。串联亲和纯化技术特别适用于研究蛋白质在生理条件下的相互作用。该技术通过在靶蛋白质一端嵌入一个特殊的蛋白质标签不破坏靶蛋白质调控序列且靶蛋白质表达量与体内水平相当经过两步连续的亲和纯化获得接近自然条件的特定蛋白质复合体后用质谱技术或Edmn降解法进行蛋白质鉴定。与传统的
2、研究蛋白质相互作用的技术相比，TAP技术具有周期短、假阳性结果少等优点。2.显性失活突变(DominantNegativeMutation)即显性负突变只有单个基因拷贝即可导致野生型基因产物失去活性的突变体。在信号转导领域中指本身失去转导信号功能，而且同时能使野生型蛋白也失去活性的信号转导蛋白突变体。可导致相关信号通路的组成性阻断。3.基因敲除突变(geneknockout)即用一个突变的基因去修饰其对应的野生基因，以观察中止原基因正常功能时的生物学变化。或指用DNA重组技术敲除宿主基因组中的某
3、一靶基因。以小鼠为例，先将待敲除基因制成缺失突变而代之以一个选择基因(如neo)，同时再接上另一个选择基因(如tk)，然后将这一段已失去靶基因功能的DNA插入载体，转入在体外培养的小鼠胚胎干细胞——ES细胞。通过细胞内同源重组将基因组中有功能的靶基因置换掉，也就是敲除了靶基因。只有同源重组的整合，才能把接在靶基因旁边的选择基因去掉;非同源重组则会把失去功能的靶基因序列连同两个选择基因一起整合在ES细胞基因组里。这样，用选择培养基就可选出敲除了靶基因的胚胎干细胞克隆。将这种胚胎干细胞注入小鼠早期胚
4、胎。由于胚胎干细胞是二倍体细胞，所以靶基因被敲除的干细胞是该基因的杂合体，即只有一个等位基因被敲除。4.功能互补(complementation)实验如果在某个敲除突变株细胞中导入一个外源基因后可以使得该敲除突变株恢复为野生型,则认为导入的外源基因与敲除基因是功能互补的,这个方法可以预测外源蛋白的生物学功能5.合成遗传列阵分析(Syntheticgeneticarray,SGA)6.联合致死/致病作用(syntheticlethal/sickinteraction)带有两种不同突变的细胞杂交,重
5、组产生的后代不能存活或活力减弱的现象被称为联合致死/致病作用.7.温度敏感突变株(temperature-sensitivemutant)在正常培养温度下，菌体生长良好，当温度提高到一定程度时（如30℃提高到40％），停止生长，而只产酸，具有这种特性的菌株就称为温度敏感型突变株8.酵母的生活周期(lifecycleoffissionyeast)裂殖酵母的营养体主要以单倍体形式存在和生活；以裂殖方式进行无性繁殖。在特定条件下进行有性生殖。生活周期受到营养条件的调控:在营养丰富的条件下,细胞生长和进
6、行有丝分裂。在营养缺乏的条件下，细胞终止在细胞周期中的G1期，进行性别上分化，不同性别的单倍体细胞交配，形成二倍体的接合子,经减数分裂和萌发,形成四个孢子。最有效的引导有性繁殖的方法是氮饥饿。9.非接合子型子囊(Azygoticasci) asciarelinear,andareproducedbysporulationofadiploidstrain.Theascuslookslikeasinglecell.Thesporeslookmoretightlypacked.子囊是线性的,是由一个
7、二倍体孢子形成的。这个子囊看起来像一个单一的细胞。孢子很紧凑第4页共4页10.什么是蛋白质标签(tag),用途是什么?是基因移植到一个重组蛋白。通常,这些标签是可移动的化学制剂或酶的手段,如蛋白质水解或蛋白拼接。标签是基于各种目的而附在蛋白质上的用途:分离和纯化蛋白(包括蛋白复合物)并鉴定与YFP结合的蛋白(TAP)亚细胞定位（GFP)测定YFP的表达（FLAG,HA,Myc)分析蛋白质之间的相互作用（FLAG,HA,Myc)11.易错PCR易错PCR 是在采用DNA聚合酶进行目的基因扩增时，通
8、过调整反应条件，如提高镁离子浓度、加入锰离子、改变体系中四种的dNTPs浓度或运用低保真度DNA聚合酶等，来改变扩增过程中的突变频率，从而以一定的频率向目的基因中随机引入突变，获得蛋白质分子的随机突变体。其关键在于对合适突变频率的选择，突变频率太高会导致绝大多数突变为有害突变，无法筛选到有益突变;突变频率太低则会导致文库中全是野生型群体。理想的碱基置换率和易错的最佳条件主要依赖于突变的DNA片段的长度。12.无效突变(nullmutation)由于大片段插入、缺失或重排而导致基因产物完全无效13
