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《禽偏肺病毒C型核衣壳N蛋白的哺乳动物细胞表达系统表达及鉴定.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第29卷第4期北京农学院学报Vo1.29,NO.42Ol4年l0月JOURNAIOFBEIJINGUNIVERSITYOFAGRICULTUREOct.,2014禽偏肺病毒C型核衣壳N蛋白的哺乳动物细胞表达系统表达及鉴定李子璇。,韦莉,王菁,朱姗姗,张春燕,柳舒航,全荣。,阎旭,陈武,刘爵。(1.北京农学院动物科学技术学院,北京102206;2北京市农林科学院畜牧兽医研究所,北京100097)摘要:利用哺乳动物细胞表达系统对禽偏肺病毒c型核衣壳N蛋白进行表达,并检测所表达融合蛋白的抗原性。首先将N基因克隆到真核表达载体pEGFPC1中,
2、构建重组真核表达载体,然后将阳性重组质粒转染BHK一2l细胞,通过倒置荧光显微镜和共聚焦显微镜检测N蛋白的表达,并用Westernblot检测表达蛋白的抗原性。结果显示,禽偏肺病毒核衣壳N蛋白主要表达在细胞浆中,在转染后48h后表达量最高;与抗N蛋白抗体有抗原性,所表达核衣壳N融合蛋白大小为72kDa左右,与预期结果一致。结论,本试验成功应用哺乳动物表达系统表达了禽偏肺病毒C型核衣壳N蛋白,表达蛋白具有抗原性,为与禽偏肺病毒核衣壳N蛋白的相关研究奠定了基础。关键词:禽偏肺病毒核衣壳N蛋白;哺乳动物细胞表达系统;显微镜观察;Western
3、blotting中图分类号:$851.2网络出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/l1.2156.S.20140530.2022.001.html文章编号:1002-3186(2014)04-0049-05文献标志码:Adoi:10.13473/j.cnki.issn.1002—3186.2014.0083Mammalianexpressionandidentificati0nofavianmetapneumovirussubgroupCnucleocapsidproteinLIZixuan~,WEI
4、Li,WANGJing,ZHUShanshan,ZHANGChunyan。,LIUShuhang,QUANRong,YANXu,CHENWu,LIUJue(1.CollegeofAnimalScienceandTechnology,BeijingUniversityofAgriculture,Beijing102206,China;2.InstituteofAnimalHusbandryandVeterinaryMedicine,BeijingAcademyofAgricultureandForestrySciences,Beijing
5、100097,China)Abstract:TheaimsofthispaperweretoexpresssubgroupCavianmetapneumovirusvirus(aMPV)nucleocapsid(N)proteinbyEukaryoticexpressionsystemandtofurtheranalyzetheantigenicityoftherecombinantprotein.TheNgenewasclonedintoeukaryoticexpressionpEGFP-C1vectortoobtainthereco
6、mbinantexpressionvector.ThepositiverecombinantexpressionvectorwastransfectedintoBHK-21cells.TherecombinantNproteinexpres—sionwasanalyzedbyconfocalmicroscopyandinvertedfluorescencemicroscopeandtheantigenicityoftherecombi—nantproteinbywestern-blotting.Theresultsdemonstrate
7、dthattheNproteinexpressedmainlyinthecytoplasmandexhibitedaspecificandsinglebandwithasizeofabout72kDawhenreactedwithamonoclonalantibodyraisedagainstsubgroupCaMPVNprotein.Inconclusion,thisstudyexpressedaMPVNproteininmammalianexpres—sionsystemwithagoodantigenicity,whichmade
8、thefoundationworkfortherelatiedstudyofaMPVNprotein.Keywords:avianmetapneumovirusnucleocapsid(N)protein;
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