甲状腺素联合多奈哌齐对成年期甲状腺功能减退症大鼠额叶乙酰胆碱、munc-18的影响.pdf

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1、安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2015Jan；50(1)·25·甲状腺素联合多奈哌齐对成年期甲状腺功能减退症大鼠额叶乙酰胆碱、munc一18的影响蔡瑶俊，查小雪，宁丹，王囡，贾雪梅，朱德发摘要目的观察甲状腺素联合多奈哌齐对成年期甲状腺突触前膜胞内蛋白，参与乙酰胆碱的释放，在突功能减退症(简称甲减)大鼠额叶内乙酰胆碱含量以及触囊泡“胞外排”方式分泌神经递质过程中起重要munc．18表达的影响，探讨甲减脑额叶损伤及恢复的可能分作用J。研究表明甲减大鼠生理剂

2、量的甲状腺子机制。方法采用给予含0．05％丙基硫氧嘧啶的饮用水素替代治疗后，脑内突触相关蛋白的损伤未完全恢6周建立大鼠甲减模型。自第5周起，给予多奈哌齐、甲状复。多奈哌齐作为一种乙酰胆碱酯酶抑制剂，在改腺素或甲状腺素联合多奈哌齐治疗2周，采用放射免疫法检测血清甲状腺激素水平，碱性羟胺比色法测定额叶内乙酰胆善认知功能以及神经保护方面起重要作用J。该碱含量，免疫组化法检测额叶内munc一18的分布与表达。结研究旨在观察成年期甲减大鼠额叶内乙酰胆碱含果甲减组、多奈哌齐治疗组大鼠血清三碘甲状腺原氨酸量、munc

3、一18表达变化以及探讨甲状腺素联合多奈(13)、四碘甲状腺原氨酸(T4)水平显著减低、促甲状腺激素哌齐治疗的恢复效果。(TSH)水平明显增加(P<0．01)，甲状腺素治疗组、联合治疗组T3、T4、TSH水平与正常对照组相比差异无统计学意1材料与方法义；甲减组大鼠额叶内乙酰胆碱含量下降(P<0．05)，多奈哌齐治疗组、甲状腺素治疗组、联合治疗组乙酰胆碱含量均1．1实验动物40只健康成年雄性SD大鼠，普通恢复至正常水平，其中联合治疗组有进一步恢复趋势；甲减级，体重260～300g，购自南京实验动物中心。常组

4、、多奈哌齐治疗组大鼠munc一18在额叶内Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、V层规条件下喂养，自然采光，自由接受标准锯齿类动物表达下降(P<0．05)。其中，以Ⅲ／V层下降最为显著(P<食物以及饮水。实验遵循《安徽医科大学实验用动0．O1)，甲状腺素治疗组munc一18表达仍下降(P<0．05)，联物管理和使用指南》。合治疗组额叶内munc-18表达正常。结论多奈哌齐可以1．2主要仪器及试剂改善甲状腺功能减退引起的额叶内乙酰胆碱含量改变；甲状1．2．1仪器DXM1200F光学显微镜(日本Nikon腺素联合多奈哌齐治疗有利于成

5、年期甲状腺功能减退造成公司)；DFM296型16管放射免疫计数器(合肥众成的额叶内胆碱含量改变和突触蛋白损伤的恢复。关键词甲状腺功能减退症；额叶；乙酰胆碱；munc．18；左旋机电技术开发有限公司)；JEDR801D形态学图像甲状腺素；多奈哌齐分析系统(江苏捷达科技发展有限公司)；酶标仪中图分类号R581．2；R322．81；R446．6—3；R977．14(美国Biote仪器有限公司)。文献标志码A文章编号1000—1492(2015)01—0025—051．2．2试剂丙基硫氧嘧啶(propyhhio

6、uracil，PTU)、左旋甲状腺素(1evothyrocine，L—T4)、多奈哌成年期甲状腺功能减退症(简称甲减)可引起齐(美国Sigma公司)；三碘甲状腺原氨酸(triiodo．脑部额叶损害，额叶皮质是对学习记忆很重要的脑thyronine，T3)、四碘甲状腺原氨酸(tetraiodothyro—部结构¨J。研究表明甲减可以损伤额叶内突nine，T4)、促甲状腺激素(thyroid—stimulatinghor-触相关蛋白的表达及胆碱能系统。脑内乙酰胆碱是mone，TSH)放射免疫试剂盒(北京北方

7、生物技术研中枢神经系统最重要的神经递质之一，在其释放过究所)；BCA蛋白定量试剂盒(美国Thermo公司)；程中有多种突触相关蛋白的参与。munc一18是一种DAB染色试剂盒、SP-0022生物素标记羊抗兔IgG2014—09—18接收sP超敏试剂盒(北京博奥森公司)；抗munc．18蛋白基金项目：国家自然科学基金(编号：81272152)多克隆抗体(美国BD公司)。作者单位：安徽医科大学第一附属医院老年内分泌科，合肥1．3动物模型建立大鼠适应性喂养1周，随后将23o022其随机均分为5组：正常对照组、

8、甲减组、多奈哌齐安徽医科大学基础医学院综合实验室，合肥230032治疗组、甲状腺素治疗组、联合治疗组。正常对照组作者简介：蔡瑶俊，男，硕士研究生；朱德发，男，教授，博士生导师，责任作者，E．mail：zdfa0168自由饮水，余下4组给予含0．05％PTu饮用水6周@sian．conl制备甲减模型。第5周起，多奈哌齐治疗组每日在·26·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2015Jan；so(1