[理学]专题12基因工程的基本操作程序.ppt

《[理学]专题12基因工程的基本操作程序.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、1.2基因工程的基本操作程序7/28/20211原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游与RNA聚合酶结合位点启动子终止子编码区：能转录，编码蛋白质非编码区：不编码蛋白质,能调控遗传信息表达7/28/20212真核细胞的基因结构编码区非编码区非编码区启动子终止子编码区上游编码区下游内含子外显子与RNA聚合酶结合位点编码区：非编码区：外显子：内含子：能编码蛋白质的序列不能编码蛋白质的序列7/28/20213不编码蛋白质,能调控遗传信息表达原核细胞真核细胞不同点编码区是_____的编码区是间隔的、

2、_____的相同点都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的原核细胞与真核细胞的基因结构比较思考编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？连续不连续编码区非编码7/28/20214基因工程的基本操作程序目的基因的获取基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的检测与鉴定7/28/20215一、目的基因的获取(一)目的基因主要是______________________编码蛋白质的结构基因（二）获取目的基因的常用方法有哪些?1、从基因文库中获取2、利用PCR技

3、术扩增3、人工合成1、从基因文库中获取目的基因将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库.基因文库基因组文库部分基因文库（如:cDNA文库）（1）基因文库含有一种生物的全部基因含有一种生物的部分基因⑵基因文库的构建方法①直接分离法基因组DNA文库的构建用限制酶切成许多片断cDNA合成过程第一步，反转录酶以RNA为模板合成一条与RNA互补的DNA单链，形成RNA-DNA杂交分子。第二步，核酸酶H使RNA-DNA杂交分子中的RNA链降解，使之变成单

4、链的DNA。第三步，以单链DNA为模板，在DNA聚合酶的作用下合成另一条互补的DNA链，形成双链DNA分子。7/28/20219②反转录法：cDNA文库的构建从基因文库获取目的基因根据目的基因的有关信息，如：基因的已知核苷酸序列；基因的功能；基因在染色体上的位置；基因的转录产物mRNA；基因的表达产物蛋白质；……来获取目的基因（如用DNA探针）基因组文库：一般针对原核生物的基因，因为基因少部分基因文库：一般针对真核生物的基因，如cDNA文库文库类型cDNA文库基因组文库文库大小小大基因中启动子无有基因中内含子无有

5、基因多少某种生物的部分基因某种生物的全部基因物种之间的基因交流可以部分基因可以说明基因文库的组建过程就包含基因工程的基本操作步骤。从基因文库中获取目的基因的优点是操作简便，缺点是工作量大，具有一定的盲目性.基因文库的构建方法7/28/202111①概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术③条件：___________、_______________、___________、___________.②原理：__________多聚酶链式反应体外特

6、定DNA片段DNA双链复制模板DNA四种脱氧核苷酸2个DNA引物热稳定DNA聚合酶2.利用PCR扩增目的基因④前提：一段已知目的基因的核苷酸序列⑤过程a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成___________b、退火（复性55℃-60℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在热稳定DNA聚合酶（Taq酶）的作用下，合成与模板互补的________。氢键单链DNA双链DNA链5/3/G—GT—C3/5/G—AC—C5

7、/3/引物ⅡG—G变性复性延伸1.目的基因DNA受热变性，解链；2.引物与单链互补结合；3.合成链在DNA聚合酶作用下进行延伸。5/3/A—G引物Ⅰ利用PCR技术扩增目的基因PCR技术扩增过程a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，断裂，形成_______b、复性（55℃-60℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的________。氢键单链DNA双链DNA链目的基因的mRN

8、A单链DNA(cDNA）双链DNA(即目的基因)反转录合成1）反转录法：以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列目的基因推测推测化学合成2）根据已知的氨基酸序列合成DNA法：3.人工合成：基因较小已知序列二、基因表达载体的构建——核心1.过程