抗炎因子TSG-6抑制兔耳瘢痕增生的实验研究.pdf

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1、安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2015Jan；50(I)。45·抗炎因子TSG．6抑制兔耳瘢痕增生的实验研究王晖，李小静，陈钊摘要目的通过建立兔耳增生性瘢痕模型，研究肿瘤坏死白聚糖的G1链结合J。Tanetal4实验证实抗炎因子刺激基因-6(TSG-6)在增生性瘢痕形成过程中的作因子TSG-6在瘢痕疙瘩、正常瘢痕和无瘢痕皮肤中用及机制。方法建立兔耳增生性瘢痕模型，右侧耳创面为的差异分布。然而，TSG-6对瘢痕组织形成的影响实验组，注射TSG-6，左侧均注射等量PBS作为对照组，通过未见报道。该研究

2、以兔耳瘢痕模型为基础观察比较各组瘢痕指数(SEI)及I、Ⅲ型胶原表达的不同来评价TSG-6局部创面注射对增生性瘢痕形成的影响，并瘢痕增生程度的差异。采用免疫组化法及逆转录聚合酶链探讨其可能作用机制。反应(RT—PCR)法检测炎症因子白细胞介素一1p(IL·1母)、白细胞介素_6(IL-6)及肿瘤坏死因子一(TNF一)在各组中的表1材料与方法达；以透射电镜观察及TUNEL法检测瘢痕组织成纤维细胞凋亡的变化。结果与PBS对照组比较，TSG-6治疗组炎症1．1主要试剂rhTSG-6购于美国R&DSystems公因子IL-1B、IL-6及TNF．0【表达减

3、少炎症反应明显减轻，瘢司，I型、Ⅲ型胶原及TNF一仪抗兔抗体购于美国Bi—痕组织成纤维细胞凋亡明显增多，且SEI及I、Ⅲ型胶原含orbyt公司，兔白细胞介素一113(interleukin．113，IL一量均低于对照组，差异有统计学意义(P<0．05)。结论抗1B)抗体、兔白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)抗体炎因子TSG-6能明显减弱增生性瘢痕的形成，其对瘢痕形成购于美国Bioss公司，二氨基联苯胺(3，3’一diamino—的抑制作用可能与抑制炎症反应及促进成纤维细胞凋亡相benzidine，DAB)购于美国ThermoFi

4、sherScientific关。公司，原位细胞凋亡检测试剂盒购于美国Trevigen关键词动物模型；增生性瘢痕；兔；炎症；TSG-6公司，逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptionpol-中图分类号R619+．6ymerasechainreaction，RT-PCR)引物设计合成于上文献标志码A文章编号1000—1492(2015)01—0045—05海捷瑞生物工程有限公司，逆转录试剂盒、RT．PCR扩增试剂盒购于宝生物工程(大连)有限公司。肿瘤坏死因子仪刺激基因-6(tumornecrosisfac．1．2兔耳瘢痕模型的建立及用

5、药选用健康成年torstimulatedgene6，TSG-6)是肿瘤坏死因子仪新西兰大耳兔6只(购自安徽医科大学实验动物中诱导蛋白一6(tumornecrosisfactoralphainducedpro．心)，雌雄不拘，体重2．5—3．0kg，分笼饲养。兔耳tein，TNFAIP6)的编码基因，是在筛选肿瘤坏死因瘢痕模型的制作参照Morrisetal[方法：用3％戊巴子-仅(tumornecrosisfactor仅，TNF一)干预的人纤维比妥钠30mg／kg进行耳缘静脉麻醉，严格无菌操作细胞cDNA表达文库时发现的一个新基因，其表达条件下，选取

6、兔耳腹侧面远离耳根部位无毛或少毛可被TNF一和白细胞介素-1(interleukin一1，IL-1)等区，沿长轴避开可见血管，以角膜环钻在兔耳腹侧作许多信号分子诱导J。由于基因启动子序列中存直径为7mm创面，去除兔耳全层皮肤并刮除软骨在激活物蛋白1和核因子白细胞介素结合位点，膜，每只兔耳作6个相同创面，共计72个创面，术后TNF一仅、IL-1等促炎因子刺激后，该基因在成纤维细创面暴露。选择兔右耳瘢痕作为TSG-6实验组，兔胞中表达显著增高，因此被认为是一个受TNF．仪调左耳瘢痕为PBS对照组。1IxgTSG．6予10txlPBS节的、参与多种炎性反

7、应的基因。TSG-6基因编码溶解后用微量注射器分别于术后当天及术后5、10、蛋白含277个氨基酸，属透明质酸(hyaluronicacid，15d进行右侧耳创面局部注射，左侧兔耳创面同时HA)结合蛋白家族，主要由相邻的连接组件和CUB注射等量PBS作对照。术后26d，3％戊巴比妥钠组件组成，可与HA、硫酸软骨素、蛋白多糖以及蛋做耳缘静脉麻醉，切取标本。用作HE、免疫组化染2014—09—25接收色的标本置于4％中性甲醛中固定，其余均用深低基金项目：国家自然科学基金(编号：81272107)温冰箱一80℃保存。作者单位：安徽医科大学第一附属医院整形外

8、科，合肥2300221．3方法作者简介：王晖，男，硕士研究生；李小静，女，教授，主任医师，硕士生导师，责任作者，E．1．3