体外冲击波抑制兔耳增生性瘢痕的实验研究

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1、中文摘要体外冲击波抑制兔耳增生性瘢痕的实验研究尽管在过去数年间诊疗技术方面取得了突飞猛进的发展，增生性瘢痕(HS)的预防和治疗仍是临床医生亟待解决的难题之一。HS不仅严重影响机体功能和美观，还可因疼痛（或触痛）和感觉异常（瘙痒、烧灼感）导致患者睡眠障碍、焦虑、抑郁，显著降低患者的生活质量。随着社会经济水平和人们对自我形象的注重，HS的防治受到越来越多的关注。研究HS的预防和治疗对提高患者的生活质量具有重要意义。目前关于HS形成的机制主要包括：细胞因素、细胞因子因素、微循环因素、免疫因素、基因表达因素、创面因素等。HS的治疗目标是恢复功能，缓解症状，改善外观和

2、预防复发。目前已有多种方法用于增生性瘢痕的治疗，如外用或局部注射药物、手术治疗、物理治疗（如激光疗法、加压疗法、按摩等）、放射治疗、冷冻疗法、基因治疗等。虽然可选择的方法多样，然而上述各种疗法却存在不同程度的不足之处，如手术的创伤性，脉冲染料激光可引起局部色素改变和对较厚的HS效果不理想。瘢痕内药物注射除可引起疼痛和色素改变外，还可引起注射部位的水疱、溃疡和坏死。加压疗法可因高压力引起的不适感、限制活动和影响外观而使患者依从性下降。而冰冻疗法治疗瘢痕可引起色素缺失，放射疗法则存在放射性皮炎和潜在的致癌可能。因此，寻求一种无创、安全、有效和经济的方法治疗增生性

3、瘢痕具有重要意义。体外冲击波疗法(ESWT)具有无创、安全、操作简便等优势，目前已广泛应用于泌尿系和消化系结石、骨折不愈合或延迟愈合、肩周炎、肱骨外上髁炎慢性软组织疾病。此外，ESWT还广泛用于改善组织缺血、治疗烧伤和糖尿病足、提高皮肤/皮瓣移植成活率等方面。ESWT的作用机制包括：促进创面血管生成，增加组织血流供应，抑制早期的炎症反应，促进间充质干细胞和内皮祖细胞趋至创面，刺激创面细胞增殖、分化和再生，减轻创面细菌定植等。虽然ESWT在急慢性创面的治疗中显示出优越性，然而关于其对瘢痕治疗效果的研究却十分有限。本研究中，首先制备兔耳腹侧面全层组织缺损模型，造

4、模21天后HS2形成（经病理切片证实）。将白兔随机分为低能量ESWT组（能流密度0.1mJ/mm）、2高能量ESWT组（能流密度0.2mJ/mm）和对照组。ESWT组白兔分别于造模成功后第1、4、9、14、21、28天给予不同能流密度ESWT处理，对照组未予任何处置。分别于第一次ESWT处理后1、4、7、10、14、21、28、35天观察并记录瘢痕颜色、质地变化，同时采集组织样本，通过下述分子生物学和病理学手段检测以下指标：®1.通过Antera3D成像系统测量瘢痕直径、面积、隆起体积、质地、皱褶、黑色素、血红素的变化；2.病理学染色观察ESWT对HS组织学

5、的影响：HE染色观察瘢痕增生指数（hypertrophicindex,HI）、成纤维细胞（Fb）形态和密度、毛细血管数及炎性细胞浸润情况；Masson染色明确胶原纤维分布情况；3.瘢痕增殖和分化的研究：逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测增殖细胞核抗原(PCNA)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的基因表达情况；免疫组化染色明确二者在细胞内表达情况；4.对转化生长因子-β1（TGF-β1）/Smad通路影响的研究：RT-CPR分别检测TGF-β1、Smad2、Smad3的基因表达水平；酶联免疫吸附试验检测TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7

6、的蛋白表达水平；实验主要结果：一、大体观察ESWT处理后3周，两ESWT组瘢痕颜色开始并略淡于对照组，并且变得扁平和软化。4周时，对照组瘢痕开始退变软化，但仍可见明显凸起，颜色较治疗组仍发红。低能量ESWT组和高能量ESWT组瘢痕变平，硬度与色泽较对照组减轻。两ESWT组间相比无明显差别。®二、Antera3D检测结果1.瘢痕皱褶：与对照组相比，低能量ESWT组处理14天、高能量ESWT组处理21天后瘢痕皱褶开始显著减少（t=-2.195,P=0.042；t=-2.267,P=0.037），并可持续至第四周。2.瘢痕质地：与对照组相比，低能量ESWT组处理4

7、周后瘢痕质地出现明显改善（t=-2.788,P=0.014）。高能量ESWT组处理后瘢痕质地未见明显改善。3.瘢痕直径、面积、隆起体积和黑色素：与对照组相比，低能量ESWT组和高能量ESWT组对瘢痕上述参数均未见有明显影响。4.瘢痕血色素：与对照组相比，低能量ESWT组处理两周后瘢痕血色素开始明显下降（t=-2.361,P=0.040）；处理3周后，低能量ESWT组和高能量ESWT组与对照组瘢痕血色素相比均存在显著差异（t=-2.474,P=0.043；t=-2.838,P=0.025），这一差异在第四周仍可见到。三、兔耳瘢痕组织的组织病理学检测1.HE染色

8、1周：各组间炎细胞浸润、微血管增生、HI无显著差异。