改良培养基生产仔猪副伤寒活疫苗的研究.pdf

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1、《江西畜牧兽医杂~)2o15年第1期·粤盒研究·文章编号：1004-2342(2015)Ol一0016-02中图分类号：$855．F2文献标识码：B改良培养基生产仔猪副伤寒活疫苗的研究李宏英，李强华(中牧实业股份有限公司江西生物药厂，江西南昌330200)摘要：为提高仔猪副伤寒活疫苗质量，降低生产成本，使用某培养基生产企业生产的仔猪副伤寒干粉培养基，添加0．75％的水解乳蛋白，配制成合成培养基(以下称改良培养基)，用于仔猪副伤寒活疫苗(c5oo株)的生产，同时与自制培养基进行比较。结果表明，改良培养基培养的活茵数平均达：~x]515xlOsCFU·m

2、L-，高于自制培养基水平(450x108CFU·mL-t)；改良培养基生产的活疫苗活菌率达5O％以上，分别用兔做安全检验、产品经12个月的保存后计活茵数，均符合《中华人民共和国兽药典)2010年版三部[1]的质量要求。试验表明，改良培养基替代自制培养基用于仔猪副伤寒活疫苗(c5oo~)的生产是可行的，并能降低生产成本。关键词：仔猪副伤寒；改良培养基；菌液活茵数仔猪副伤寒是由猪霍乱沙门氏菌(almonella琼脂培养基、葡萄糖蛋白胨培养基(江西生物药厂)。eholeraesuis)引起的急性、亚急性或慢性传染病，它1．4菌种是一种条件性传染病。主要发生

3、于2～4月龄仔猪，猪霍乱沙门氏菌C500弱毒株(CCVCC795o0)来急性病例表现为败血症，慢性病例表现为消瘦和坏自江西生物药厂。死性肠炎。该病全国都有发生，对养猪业的危害很2方法大，预防该病主要使用弱毒活疫苗翻。《中华人民共2．1自制培养基生产仔猪副伤寒活疫苗方法和国兽用生物制品操作规程12000年版圈(以下简称2．1．1含l％～1．5％蛋白胨的普通肉汤培养基制备。“规程”)中仔猪副伤寒活疫苗的生产主要采取灌体使用冻冰牛肉、崩谣白胨、氯化钠，按“规程”要求配培养，培养基是由生产企业自行配制的含1％～1．5％制成营养肉汤，使用8％氢氧化钠调节pH7

4、．2～7．6，蛋白胨的普通肉汤。商品化仔猪副伤寒干粉培养基进罐培养基30xl04mL。使用方便，按一定比例加入注射用水配制即可。为2．1．2培养基在线灭菌液体。培养基使用水泵通过管保证产品质量，降低生产成本，对仔猪副伤寒干粉道打进罐内，加入猪油做消泡剂，116℃灭菌40min。培养基进行了改良，分别对改良培养基与自制培养2．1．3细菌培养及菌液制备。生产用一级种子和二级基生产的产品的质量和成本进行了比较。种子按“规程”要求进行选育和繁殖，进灌培养按1材料2％的接种量接入二级种子，通气培养，每小时测pH1．1主要材料值一次，pH值超过7．5以上时用40

5、％葡萄糖溶液调牛肉(自购黄牛肉)、麻蛋白胨(北京奥博星节pH值，培养至21h结束，使用冷却水冷却后续流20090902批)、仔猪副伤寒干粉培养基(某厂)、水解高速离心浓缩，收集菌体取样进行纯粹检验和活菌乳蛋白(美国BD公司)、猪油(定点购买)，葡萄糖、计数，24h后根据活菌计数结果，决定每头份的投入氯化钠、氢氧化钠、明胶、蔗糖，均购自上海国药集团。活菌数，加一定比例的明胶蔗糖保护剂，配苗、分1．2实验动物装、冻干、轧盖、贴签。普通级大耳白兔，体重1．5~2．0kg，购自定兔厂。2．2改良培养基生产仔猪副伤寒活疫苗方法1．3检验用培养基2．2．1每次3

6、0xl04mL，在商品化仔猪副伤寒干粉培普通琼脂平板、硫乙醇酸盐酸盐培养基、酪胨养基的基础上按0．75％比例加入水解乳蛋白配成改·16．《江西畜牧兽医毒k,)2o15年第1期·雪窿研究·良培养基，使用8％氢氧化钠或盐酸调pH值7．2干后产品依据《中华人民共和国兽药典)2010年版【1]7．4，配制的液体培养基进罐方式和灭菌温度、接种依次进行安全检验、活菌计数、冻干后活菌率及保量、培养方式等与自制培养基一致，后续工艺与自存期试验，比较两种培养基的生产成本。制培养基相同。3结果2．3用3批自制培养基生产6批(1001001、1001002、3．1各产品生

7、产和检验结果1001003、1001004、1001005、1010006)仔猪副伤寒改良培养基生产的仔猪副伤寒活疫苗C500活疫苗产品，3批改良培养基生产6批(1006022、株，菌液活菌数达到自制培养基生产的水平，冻干1006023、1011024、1011025、1011026、1011027)仔猪后的11批产品依次进行安全检验、活菌计数、冻干副伤寒活疫苗产品，对菌液菌数进行活菌计数，冻后活菌率检验，结果均符合要求(表1o表111批产品生产、检验结果生产日期培养基(x1L)培养时间(h)茵液茵数(1OBCFL)冻干产品批号冻干万头份冻干后活苗数

8、(10℃FU／头份)冻干后活茵率(％)3．2冻干产品保存期试验表3自制培养基与改良培养基成本对比对改良培养基