普通生物学实验内容实验一显微镜的构造和使用方法实验二

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1、普通生物学实验内容★实验一显微镜的构造和使用方法★实验二显微镜临时装片方法以及微生物标本长度的测量★实验三生物绘图技术★实验四真核细胞结构观察★实验五蛋白质沉淀反应★实验六血型的测定实验一显微镜的构造和使用方法一、实验目的1、掌握一般光学显微镜的基本构造和功能。2、学会正确使用显微镜及其保护方法。二、实验材料和用品1、实验材料：植物花粉或花瓣2、实验器材及用品：生物显微镜；载玻片；盖玻片；镊子；滴管；吸水纸；擦镜纸；二甲苯。三、一般光学显微镜的结构1、机械部分：用来装置与调节光学部分。包括以下部件：①镜座：用以稳定和支持显微镜。②镜柱：镜座上的短柱，联系于镜座与镜臂之间，用以支持显

2、微镜的其他部分。③镜臂：它有支撑镜筒、载物台、照明装置以及调节焦距装置等作用。④镜筒：视线通过之圆筒。上端为接目镜、下端为旋转器。旋转器上有2-4个接物镜。⑤调节器：一般安装在镜筒后方的两侧，有粗细两种调节器，调节焦距之用。粗调节器可使镜筒作较大幅度升降。细调节器作比较精细的调节，能缓缓地控制镜筒升降。⑥转换器：一般都装在镜筒下方，由两个金属圆盘叠合组成，上有2-4个孔，可依接物镜放大倍数高低，顺序安装3-4个接物镜。转动转换器，可更换不同放大倍数的接物镜。⑦载物台：为放置标本的平台。位于镜筒的下方，中央有一孔，为光线通路，台上装有一对压片夹，用来固定标本。有的载物台上装有标本移动

3、器，既可固定标本，又可前后左右移动标本。标本移动器上有标尺，用以寻找物象。以上部件见图1-1。2、光学部分：包括产生物像的光学系统和照明光学系统两部分。①接目镜：装在镜筒上端，有5×、8×、10×、15×等不同放大倍数，根据需要选择一个接目镜插入镜筒中使用。②接物镜：一台显微镜常有2-4个接物镜，分低倍（10×）、高倍镜（45×或40×）和油镜（90×或100×）。在接物镜上刻有镜口率为0.3、0.5、1.25等标记，这些标记的数字越大，其放大率越高。显微镜的总放大倍数是接目镜的放大倍数与接物镜的放大倍数的相乘积。③聚光器和光圈：装置在载物台下面。聚光器是由一组聚光透镜组成，其作用

4、是聚焦反光镜所反射的光线于观察物上，光圈位于聚光器下方，由多个金属页片组合而成，有一小柄控制。推移小柄，可使光圈孔径缩小或放大，藉以调节入射光量，使照明调到最适程度。④反光镜：在聚光器下面，由一平面镜和一凹面镜组成，它是把光源射来的光线反射向上，使穿过聚光器，照明标本。四、光学显微镜的成像原理显微镜的放大作用是通过透镜来完成的，单透镜成像具有像差和色差，影响物像质量。由单透镜组合而成的透镜组相当于一个凸透镜，放大作用更好，可消除或部分消除像差和色差。图1-2是显微镜的成像原理模式。A′′B′′和眼睛的距离为显微镜的明视距离，标本AB的像经过L0（物镜）后到A′B′处成为一个放大倒立

5、的实像（中间像），F为L0的后焦点。当光线传到Le（目镜）时，在A′′B′′处，A′B′被放大成一个直立的虚像，然后传递到视网膜A′′′B′′′上，标本AB就被放大了，人眼看到的是AB被放大后的虚像，A′′′B′′′与原样品像的方向是相反的。见图1-2。五、显微镜的性能显微镜分辨能力的高低决定于光学系统各部件的质量。物像放大后，能否呈现清晰的细微结构，主要取决于物镜性能，其次为目镜和聚光器的性能。1、数值孔径：也叫做镜口率（或开口率），简写为NA，在物镜和聚光器上都标有它们的数值孔径，数值孔径是物镜和聚光器的主要参数，也是判断它们性能的重要指标。数值孔径和显微镜的光学性能有密切的关

6、系，它与显微镜的分辨率成正比，与焦深成反比，与镜像亮度的平方根成正比。数值孔径可用下式表示：式中：n-物镜与标本之间的介质折射率；α-物镜的镜口角。见图1-3。NA＝nsina22、分辨率：分辨率是指分辨物像细微结构的能力。分辨率常用可分辨出的物像两点间的最短距离（D）表示，而D又和二分之一波长（λ）及物镜的数值孔径有关。因为光波只能对其波长较长的物体造像，若某个物体小于二分之一波长，光线可绕过该物体，不能造像。D可用下式计算：D＝λ/（2NA）可见光的波长为0.4~0.7μm，平均波长为0.55μm。若用数值孔径为0.65的物镜，则D＝0.55μm/（2×0.65）＝0.42μm

7、，这表示被检物体在0.42μm以上时可被观察到，若小于0.42μm就不能视见。如果使用数值孔径为1.25的物镜，则D＝0.22μm。凡被检物体长度大于这个数值，均能视见。由此可见，D值愈小，分辨率（分辨能力）愈高，物像愈清楚。根据上式，可通过以下措施来提高光学显微镜的分辨率：①减低波长；②增大折射率；③加大镜口角来提高分辨率。见图1-4。以紫外线作光源的显微镜和电子显微镜就是利用短光波来提高分辨率以检视更小的物像的。物镜分辨率的高低与造像清晰度有密切的关系。目镜没有这