地中海贫血初筛表型阴性的育龄人群基因检测结果分析.pdf

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1、·3836·广东医学2014年12月第35卷第24期GuangdongMedicalJournalDee．2014，Vo1．35，No．24地中海贫血初筛表型阴性的育龄人群基因检测结果分析林金端，李介华，黄振勇，叶韵婕广东省清远市人民医院检验科(511500)【摘要】目的了解地中海贫血(地贫)初筛表型阴性的育龄人群地贫基因携带情况和基因型分布。方法收集进行地贫筛查和基因诊断且平均红细胞体积(MCV)>79fL、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)>27Pg的育龄青年资料689例，采用gap—PCR扩增法检测3种常见的缺失型地贫基因，P

2、CR一膜反向点杂交(PCR—RDB)技术检测17种突变型B地贫基因。结果689例MCV>79fL、MCH>27Pg的育龄人群中，检出45例携带地贫基因，男女携带率差异无统计学意义(=3．116，P>0．05)；其中地贫41例(一a3．7／o~cx25例、一a4．2／om~12例、一一SEA／om~4例)，3种缺失型地贫基因构成比差异有统计学意义(P<0．05)；0【复合B地贫2例(基因型为IVS—II一654合并一一sEA／、CD41一CD42合并一一sEA／)；B地贫2例(基因型为13EM)；未发现其他点突变类型B地贫基因携带者

3、。结论MCV>79fL、MCH>27Pg并不能完全排除携带地贫基因的风险，其基因型以一3．7／oLcx为主。【关键词】地中海贫血；平均红细胞体积；平均红细胞血红蛋白含量；基因型；表型地中海贫血(地贫)基因携带者或患者常伴有血1．3全血基因组DNA提取收集静脉血2mL，枸橼液表型的改变，有研究表明，平均红细胞体积(mean酸钠抗凝，采用酚氯法，按照提取全血基因组DNA试corpuscularvolume，MCV)、平均红细胞血红蛋白含量剂盒(深圳益生堂公司)说明书操作提取基因组DNA。(meancorpuscularhemoglob

4、in，MCH)是筛查地贫的最DNA样本一20℃保存。佳红细胞参数。国际地贫协会(Thalassaemia1．4地贫基因检测采用裂口PCR(gap—PCR)扩增InternationalFederation)制定并推荐以MCV<79fL和法检测3种常见的缺失型地贫基因(即东南亚型缺失一一SEA、右侧缺失一0【3．7、左侧缺失一．2。采用MCH<27Pg作为初筛地贫表型阳性的指标，其缺陷PCR一反向斑点杂交(reversedotblot，RDB)技术检测在于可能存在部分基因携带者，特别是静止型地贫B珠蛋白基因突变的8个常见位点(CD4

5、1—42、IVS—的漏检。目前，国内对MCV、MCH降低的人群的地II一654、CD17、一28、CD26、CD71—72、CD43、一29)和贫基因型分布研究较多，但对于MCV、MCH正常或9个少见位点(CD14—15、CD27—28、一32、一30、IVS—降低不明显的人群基因携带情况和基因型分布研究少I—I、IVS—I—V、CD31、CAP、Int)。试剂盒由深圳益生见报道。本研究通过分析广东清远地区MCV>79fL、堂公司提供，用CFX96型荧光定量PCR仪(Bio—RadMCH>27Pg的育龄人群地贫基因的携带情况以及基

6、公司)检测，严格按照试剂盒及仪器说明书操作。因分型，探讨以MCV、MCH筛查地贫主要漏检基因型，1．5统计学方法采用SPSS17．0统计软件，男女携为优化地贫诊断流程提供实验数据。带率比较采用四格表检验，构成比比较采用行×列1资料与方法表分割检验。1．1一般资料收集2012年1月至2014年6月在本2结果院进行地贫筛查和基因诊断且MCV>79fL和MCH>689例MCV>79fL、MCH>27Pg的育龄人群中，27pg的育龄人群资料，包括年龄、性别、用药情况等。共检出45例地贫基因，其中一3．7／cm~25例、一4．排除近期输血、

7、急慢性失血、感染，以及服用红细胞生2／0【12例、一一sEA／4例，仅复合B地贫2例(基成素、盐酸小檗胺等影响红细胞参数药物的影响，列入因型为IVS—II一654合并一一sEA／仅、CD41一CD42统计共689例，年龄18～42岁，平均(28±6)岁；其中合并一一sEA／0【o【)、B地贫2例(基因型为[3EM)；男男278例，女411例。均为广东清远地区汉族人群。女问携带率差异无统计学意义(x=3．116，P>本研究经医院医学伦理学委员会批准，研究对象知情0．05)；3种缺失型地贫基因构成比为一仅3．7／otc~同意。(60．

8、97％)>一4．2／ctc~(29．27％)>一一SEA／ao~1．2MCV、MCH检测采集各研究对象清晨空腹静(9．76％)，差异有统计学意义(P<0．05)；未发现其他点突变类型轻型、中间型、重型B地贫基因。见表1。脉血2mL，EDTA—K抗凝