葛根异黄酮对去卵巢大鼠血管内皮功能的保护作用.doc

《葛根异黄酮对去卵巢大鼠血管内皮功能的保护作用.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、葛根异黄酮对去卵巢大鼠血管内皮功能的保护作用　　摘要：目的观察葛根异黄酮对去卵巢大鼠血管内皮功能的影响及机制。方法雌性SD大鼠行双侧卵巢切除术后，分别灌胃给予150mg/kg和50mg/kg葛根异黄酮，时间为12周。酶联免疫吸附法检测血清雌二醇和内皮素含量。硝酸还原酶法检测血清一氧化氮水平。在分离的各组动脉环标本上，观察乙酰胆碱诱发的内皮依赖性血管舒张反应和硝普钠诱发的非内皮依赖性血管舒张功能变化。Westernblot方法观察各组内皮组织样品的内皮型一氧化氮合酶表达变化。结果与假手术组比较，去卵巢组大鼠的血清E2、ET和NO水平出现显著改变，而且其动脉环

2、对乙酰胆碱的舒张功能出现显著性障碍，但对硝普钠的舒张效应无影响。在去卵巢术后给予大小剂量的葛根异黄酮干预后，血清E2、ET和NO水平以及内皮舒张功能，与去卵巢组比较有统计学意义。此外，葛根异黄酮也可上调去卵巢大鼠内皮组织的eNOS表达。结论葛根异黄酮具有保护去卵巢大鼠血管内皮功能作用，其机制与类雌激素样作用、上调eNOS表达和降低ET水平等因素有关。　　关键词：葛根异黄酮；内皮功能；雌激素；去卵巢大鼠　　中图分类号：R541R285.5文献标识码：A　　大量研究表明，妇女在绝经后失去雌激素对心血管的保护作用，心脑血管疾病发病率显著增加[1]。雌激素替代疗法

3、对改善绝经后妇女的心血管疾病有效，但长期应用外源性激素，有增加子宫内膜癌、乳腺癌等发病率的危险[2]。药理学研究表明葛根的主要有效成分异黄酮具有扩张血管，抑制血小板聚集和抗氧化等作用，其中葛根素、大豆甙和金雀异黄素等具有明显的雌激素样作用[3，4]。雌激素可通过影响内皮细胞功能而实现对心血管的保护作用[5]，但同样具有雌激素活性的葛根异黄酮对绝经后妇女或雌激素缺乏动物内皮功能的影响尚未见有报道。本研究主要观察了葛根异黄酮对去卵巢大鼠血管内皮功能的影响及其机制。　　1材料与方法　　1.1主要试剂和仪器葛根异黄酮由陕西中医学院新药研究中心提供；去甲肾上腺素、乙

4、酰胆碱和硝普钠为Sigma公司产品；兔抗内皮型一氧化氮合酶一抗由SantaCruz公司提供；Powerlab生物信号记录系统为澳大利亚ADInstrument公司产品；雌二醇、内皮素和一氧化氮检测试剂盒由南京建成生物工程研究所提供。　　1.2实验动物和分组实验选用雌性SD大鼠，体重250g～280g，适应性喂养1周后，随机分成4组：假手术组、卵巢切除组、卵巢切除+葛根异黄酮大剂量组、卵巢切除+葛根异黄酮小剂量组。实验动物由西安交通大学实验动物研究中心提供。　　1.3去卵巢大鼠模型和给药方法大鼠2%戊巴比妥钠腹腔麻醉后，下腹部术区剪毛，仰卧位固定。严格消毒后

5、，无菌条件下行下腹正中切口，逐层分离进入腹腔，辨别出双侧卵巢后，完整切除，并逐层缝合切口。假手术组大鼠行相同手术过程，但不切除卵巢。术后第3天，将卵巢切除大鼠随机分为3组，给予药物灌胃。大剂量和小剂量治疗组分别给予葛根异黄酮150mg/kg和50mg/kg，给药体积为1mL/100g体重，时间为12周。对照组大鼠给予等体积生理盐水。大鼠在温度22℃，湿度30%～40%的环境中饲养，自由饮水和摄食。　　1.4血清学检测各组大鼠经以上药物处理后，2%戊巴比妥钠腹腔麻醉，下腔静脉取血，分离血清，使用酶联免疫吸附法检测血清雌二醇和内皮素含量。硝酸还原酶法检测一氧化

6、氮水平。以上试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。　　1.5主动脉血管内皮功能的检测分离各组大鼠的主动脉，置于预冷的Kerb’s液中。将附着动脉的结缔组织剥离后，切制为宽约3mm的动脉环形标本。在含Kerb’s液的37℃浴槽中，将动脉环悬挂，另一端连于张力换能器，并持续给予95%O2+5%CO2的混合气。张力换能器连接于Powerlab生物信号系统，记录和分析动脉环张力变化情况。当动脉环稳定于基线后，浴槽中加入去甲肾上腺素收缩血管环，待动脉环收缩达平衡状态后，分别加入浓度为mol/L的内皮依赖性血管舒张剂乙酰胆碱，观察血管的舒张反应。然后，洗脱血管，重新平

7、衡至基线，改用累加浓度为10-9～10-5mol/L的非内皮依赖性血管舒张剂硝普钠重新舒张血管，测定各组非内皮依赖性血管舒张功能。　　1.6Westernblot提取蛋白后Bradford法测定蛋白含量。上样后，SDSAGE凝胶电泳分离蛋白。电泳结束后，湿转法将蛋白从聚丙酰胺凝胶转移到硝酸纤维素膜。室温下，脱脂奶粉封闭2h。兔抗内皮型一氧化氮合酶一抗，4℃孵育过夜。TBS漂洗3次后，加入标记辣根过氧化物酶的IgG二抗，室温孵育30min。漂洗3次膜后，在暗室里加入ECL显色2min，并曝光胶片min，采用图像分析系统进行分析蛋白印迹结果。　　1.7统计学处

8、理计量资料以均数±标准差表示，组间比较采用单因素方差分析，使用si